使用氣相或液相的時候,，小伙伴們有木有遇到這樣的情況，色譜圖的峰高和以往相比明顯降低了,，甚至成數(shù)量級的減?。煌瑫r還伴有許多雜峰,、鬼峰,。那么是什么原因?qū)е逻@個現(xiàn)象呢？據(jù)小析姐了解這多半是柱效降低的原因,，今天就和小伙伴們聊一聊如何來改善色譜柱柱效的問題,？

色譜柱的柱效能是評價色譜性能的一項重要指標(biāo)，混合物能否在色譜柱中得到分離,，除取決于選擇合適的固定相外,，還與色譜操作條件及色譜柱的裝填狀況等因素有關(guān)。在一定的色譜操作條件下,，色譜柱的柱效可用理論塔板數(shù)或理論塔板高度來衡量,。一般說來塔板數(shù)愈多，或塔板高度愈小,，色譜柱的分離效能愈好,。

如何提高HPLC柱效？

要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手,。 以下介紹了幾種國際上流行的測量和計算柱效值的方法,。

1,、提高液相色譜柱柱效的方法

要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。

（1）降低移動相的流速,但會使分析時間延長,。

（2）減少固定相的量,但色譜柱中樣品的負(fù)載量也隨之減小,。

（3）減小固定相的顆粒度,但不能過分,過分后色譜柱的滲透率也會減小。

（4）選用低粘度的移動相,以利于快速傳質(zhì),但卻不利于多組份分析,。

（5）適當(dāng)提高柱溫,可降低移動相的粘度,但柱效和分離度也隨之降低,。

（6）盡量減小停滯移動相的體積,但卻加快了移動相的流速。 

從以上介紹可看出,在色譜分析過程中,各種因素是互相聯(lián)系和制約的,。只有通過對柱效值的跟蹤測算,，對自己分析方法不斷的研究和實踐，才能找到理想的工作條件,。

2,、對柱效值進(jìn)行跟蹤測算應(yīng)注意的問題

我們也應(yīng)記住柱效值并不足以預(yù)測在所有條件下的柱性能，對大多數(shù)色譜工作者來說,，柱性能指的是色譜柱用于特定分離的能力,，而僅僅有高柱效并不能保證這種分離能力。不管用什么特定的測試方法,都會有幾個參數(shù)影響柱效的測定,。這些參數(shù)包括：洗脫液的成分和粘度及其線流速,，測定塔板數(shù)所用的溶質(zhì)、溫度,、柱長,、填料裝填方式、顆粒度,、還有所選用的測量和計算方法,。而測量和計算方法對柱效值的確定起著極大的作用。 

3,、幾種測量和計算柱效值的方法

因為色譜峰是假定樣品濃度在移動相和固定相中呈正態(tài)分布而得到的樣品譜帶分布,故常常把色譜峰型看作正態(tài)曲線來計算理論塔板數(shù),。因此計算柱效（以理論塔板數(shù)n為單位）的公式習(xí)慣上定義為:

式中tR為色譜峰的保留時間；σ2是以時間為單位測量色譜峰的偏差,；a是和峰高（從測峰寬的基線量起）有關(guān)的常數(shù),；ωb是峰寬，表示由色譜峰頂點與色譜峰兩側(cè)拐點處做切線與峰底基線相交兩點間的距離,。 假如一個色譜峰真是正態(tài)峰型,，那么每種計算方法都會得到同樣的結(jié)果。然而即使一些比較理想的儀器和傾向于得到對稱峰型的溶質(zhì),由于柱內(nèi)的槽或空隙,也會出現(xiàn)非正態(tài)峰型,。所以不同的計算方法將會得到相差較大的n值,。通常偏離正態(tài)模型的峰型表示為“前延”或“拖尾”,。對于這些峰型,，越在峰的高處測量,計算的理論塔板數(shù)值就越大（準(zhǔn)確性越低）,。在許多情況下,色譜工作者需要能反映整個峰型（包括拖尾）的柱效值，同時為了保證定量的重復(fù)性,也需要色譜峰很好的對稱性,。這時對色譜峰非對稱性敏感的計算方法合適,。如果目的僅僅是要監(jiān)測色譜柱從第一次使用到使用壽命結(jié)束這一過程中的柱效，那么以上任何一種方法都可以,，應(yīng)選擇簡便的方法,。

如何提高GC柱效？

在實際工作中,，我們通過對載氣流速,、進(jìn)樣技術(shù)、氣化室溫度,、色譜柱,、柱溫、檢測器溫度這六個方面的選擇,，有效地提高了柱效率,，使分析出的色譜峰峰形正常，無峰形擴張,、拖尾,、峰漏檢等不良現(xiàn)象出現(xiàn)，分離度高,，從而提高了分析結(jié)果的準(zhǔn)確性,。所為柱效就是在較短的時間內(nèi)，用較短的柱子達(dá)到滿意的分析結(jié)果,。為了提高色譜柱的柱效率,，減少色譜峰擴張、拖尾及峰漏檢等現(xiàn)象,，在實際工作中,，我們從以下六個方面入手，對柱操作條件的選擇進(jìn)行了探討,。 

1,、載氣流速的選擇 

氣相色譜常用的載氣是：氫氣、氮氣,、氬氣,、氦氣。    由速率理論可知,，載氣流速慢有利于傳質(zhì),，有利于組分的分離，但分析時間會加長,；如果載氣流速快有利于加快分析速度,，減少分了擴散,，但分離度降低。有時為了縮短分析時間,，加大流量,，但此時分離效果并不好?？梢娸d氣流速的快慢都會降低柱效,。

2、進(jìn)樣技術(shù)的選擇

 在氣相色譜分析中,，一般采用注射器或六通閥門進(jìn)樣,。在考慮進(jìn)樣技術(shù)的時候，以注射器進(jìn)樣為主來研究,。  

進(jìn)樣量：如果在進(jìn)樣過程中進(jìn)樣量大會導(dǎo)致：分離度?。槐Ａ糁底兓y于定性,；峰高和峰面積與進(jìn)樣量不成線性關(guān)系,，不能定量。進(jìn)樣量與氣化溫度,、柱容量和儀器的線性響應(yīng)范圍等因素有關(guān),。進(jìn)樣量應(yīng)控制在瞬間氣化，達(dá)到規(guī)定分離要求和線性響應(yīng)的允許范圍內(nèi),。 注射器里空氣的排除：用微量注射器抽取液體樣品,只要重復(fù)地把液體抽入注射器又迅速把其排回樣品瓶,就可以將空氣排除,。還有一種更好的方法,那就是用計劃注射量的約2倍的樣品置換注射器3～5次,每次取到樣品后,垂直拿起注射器,針尖朝上，留在注射器里的空氣都應(yīng)當(dāng)跑到針管頂部,，推進(jìn)注射器塞子,空氣就會全部被排掉,。 

保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確：用經(jīng)置換過的注射器取約計劃進(jìn)樣量2倍左右的樣品,垂直拿起注射器,針尖朝上,讓針穿過一層紗布,這樣可用紗布吸收從針尖排出的液體。推進(jìn)注射器塞子,直到讀出所需要的數(shù)值,。用紗布擦干針尖,。至此準(zhǔn)確的液體體積已經(jīng)測得,需要再抽若于空氣到注射器里。如果不慎推動柱塞,空氣可以保護(hù)液體使之不被排走,。  

進(jìn)樣手法：雙手拿注射器,。用一只手(通常是左手)扶針插入墊片,注射大體積樣品(即氣體樣品)或柱前壓力高時,要防止從氣相色譜儀注樣器來的壓力把注射器活塞彈出(即用右手的大拇指按壓住活塞頂部)。讓針尖穿過墊片盡可能深的進(jìn)入進(jìn)樣口,壓下注射器活塞停留1秒鐘,然后盡可能快而穩(wěn)地抽出針尖（抽出的同時繼續(xù)壓住注射器活塞),。

進(jìn)樣時間：進(jìn)樣時間長短對柱效率影響很大,。若進(jìn)樣時間過長，遇使色譜區(qū)域加寬而降低柱效率,。因此,對于沖洗法色譜而言,，進(jìn)樣時間越短越好。 

3、氣化室溫度的選擇  

氣化室溫度取決于樣品的化學(xué)和熱穩(wěn)定性,、沸程范圍,、進(jìn)樣口類型等。合適的氣化室溫度即能保持樣品瞬間氣化,，又不引起樣品分解。溫度過低,，氣化速度比較慢,，使峰形不規(guī)則，出現(xiàn)平頭峰或伸舌峰,；溫度過高使出峰數(shù)目變化,，產(chǎn)生前延峰，甚至樣品分解,。為選擇合適的氣化室溫度,，在多次的進(jìn)樣中我們發(fā)現(xiàn)，氣化室溫度比柱溫高50-100℃或比樣品組分中沸點高50-70℃較為合適,。溫度過高過低都會影響柱效,。 

網(wǎng)友支招：提高柱效的有效途徑有哪些?

1、一般柱效不好,，先排除其他問題,，都沒有問題的話就是柱子不行了。

2,、如果柱子比較老,，可以反過來小流速沖洗一下，我做過效果很好?。▋H適用舊柱子啊,，有點風(fēng)險）。 

3,、把柱頭變色的填料挖掉,，用同類新的填料填充好，效果很好,。 

4,、正向沖洗色譜柱、反向沖洗色譜柱,、超聲清洗色譜柱篩板,、如果是柱內(nèi)死體積增加則需更換新柱。

5,、色譜柱是消耗品,，理論來說，柱效很低的色譜柱是沒得救的，但是有一招,，也就是當(dāng)你發(fā)現(xiàn)色譜柱沒得救的時候可以用一下,，就是反沖色譜柱，但是你要注意的是,，流速不要設(shè)置太大,，這樣的話還能再堅持一會。如果這樣也沒用的話,，你就重新買吧,。 

6、如果柱子真的很老舊了,，就反相沖洗試試,，可能還能用一段時間，但不會太久,。在然后就只能換填料了,，或換新的柱子。

7,、我們前段時間也是柱效不好,，其他都比較正常。后來把柱子重新活化了一下,，柱效由原來的兩千升到四千多了,。不過維持了一個月又不行了。

思考與討論

提高色譜柱柱效,，請記住一個口訣：

第一柱子溫度能調(diào)高,，

第二可選柱子內(nèi)徑小。

第三柱外體積小更妙,，

第四使用超純的硅膠,。

第五氘燈要選能量高，

第六采用中空透光燈,。

第七改變有機相比率,，

第八流動相pH可鼓搗。

第九可把鍵合相選挑,，

第十改變有機添加劑,。

十一改變流動相配比，

十二縮短檢測響應(yīng)時間,。