本試劑盒僅供科研使用
 γ-氨基丁酸（GABA）含量試劑盒說明書
（貨號：WS6011F 分光法 48 樣） 一,、產(chǎn)品簡介： 4-氨基丁酸（GABA）廣泛分布在動(dòng)植物體中,。在動(dòng)物體內(nèi) GABA 幾乎只存在于神經(jīng) 組織中,。在植物中如豆屬,、參屬,、中草藥等的種子,、根莖和組織液中都含有 G A B A,， 且與植物的環(huán)境應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。 4-氨基丁酸（GABA）在堿性溶液中與次氯酸鹽和苯酚反應(yīng)生成藍(lán)綠色物質(zhì),，通過檢 測該有色物質(zhì)在 645nm 波長處的值,，即可得出樣本中 GABA 的含量。 二,、試劑盒的組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,，則用到該試劑。 三,、所需的儀器和用品： 可見分光光度計(jì),、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、可調(diào)式移液槍,、水浴鍋,、離心機(jī)、 研缽、蒸餾水,。 四,、γ-氨基丁酸（GABA）含量測定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況,，熟悉實(shí)驗(yàn)流程,，避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1,、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織樣本加入研缽中,，加入 1mL 提取液，在冰上進(jìn)行勻漿,，12000rpm,， 4℃或室溫離心 10min，取上清液待測,。 【注】：若增加樣本量,，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取。 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率 200W,，超聲 3s，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）,； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清,，置冰上待測,。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取,。 ③ 液體樣本：澄清的液體樣本直接測定,，若渾濁則離心后取上清檢測。 2,、上機(jī)檢測： ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min,，調(diào)節(jié)波長到 645 nm，蒸餾水調(diào)零,。 ② 所有試劑解凍至室溫（25℃）,。 ③ 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 100 100 試劑一 60 660 試劑二 200 試劑三 400 混勻，沸水?。?/span>95-100℃）10min,，冰浴至室溫,，呈現(xiàn)藍(lán)綠色顏本試劑盒僅供科研使用 2 色，若渾濁需 12000rpm 離心 5min,，取全部澄清上清液轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中,，于 645nm 處讀取各管的 A 值， △A=A 測定-A 對照（每個(gè)樣本需做一個(gè)自身對照）,。 【注】1.若測定管的 A 值大于 1,，則需將樣本進(jìn)行稀釋（用蒸餾水稀釋），稀釋倍數(shù) D 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算,。 2.若 A 測定-A 對照的差值在零附近徘徊,，則可增加樣本取樣量（如增至 0.2g）， 則取樣質(zhì)量 W 代入計(jì)算公式重新計(jì)算,。 五,、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0086x - 0.0033,，x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量(μg),，y 為吸光值ΔA。 2,、按樣本質(zhì)量計(jì)算: GABA 含量(μg/g 重量)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷(W×V1÷V)×D =1162.8×(ΔA+0.0033) ÷W×D 3,、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： GABA 含量(μg/104 cell)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷(500×V1÷V)×D=2.33×(ΔA+0.0033)×D 4、液體中 GABA 含量計(jì)算： GABA 含量(μg/mL)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷V1×D=1162.8×(ΔA+0.0033)×D V---提取液體積,，1mL,； V1---樣本加入體積，0.1mL,； D---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1,； W---樣本取樣質(zhì)量,； 500---細(xì)胞數(shù)量,，萬。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 標(biāo)準(zhǔn)品母液（2mg/mL）：標(biāo)準(zhǔn)品臨用前加 1mL 蒸餾水溶解,。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 mg/mL,。也可根據(jù)實(shí)際樣本來調(diào)整 標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 按照測定管的加樣體系操作,，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。