1. 細胞計數(shù)的意義
計數(shù)細胞是了解細胞數(shù)量變化的基本方法,，細胞數(shù)量變化是細胞生理功能表現(xiàn)的重要指標,，準確的細胞數(shù)量變化提供準確的功能信息，錯誤的細胞數(shù)量變化提供錯誤的功能信息,。所以細胞計數(shù)準確性決定細胞生理學研究的成功與失敗,。

2. 細胞計數(shù)要解決的問題
細胞計數(shù)的目的是確定細胞樣本中的細胞數(shù)量，一般是指單位體積內(nèi)的細胞數(shù)量,，如1升血樣本中含有多少個紅細胞,，多少個白細胞；細胞學實驗經(jīng)常需要比較細胞處理前后的數(shù)量變化,。計數(shù)細胞就是確定細胞樣本處理前后每單位樣本中含有多少個細胞,，即單位體積內(nèi)的細胞數(shù)。

3. 現(xiàn)行細胞計數(shù)儀器和計數(shù)方法存在的問題
 現(xiàn)在計數(shù)細胞的儀器和方法不少,，但計數(shù)準確度都不高,，達不到細胞學研究要求的水平。原因出在細胞計數(shù)儀設(shè)計師對細胞計數(shù)的目的要求和細胞計數(shù)操作過程,，認識不夠清楚,，設(shè)計的儀器結(jié)構(gòu)原理有問題。以細胞計數(shù)板為例,，細胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)不太合理,。細胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)是在一片玻璃板上蝕刻出一個細胞計數(shù)池，呈方形,，邊長1mm,深度0.1mm,，容積是0.1mm³=0.1微升=萬分之一毫升，底面用線分割成方格,。計數(shù)板計數(shù)的細胞數(shù)準確度沒有問題,，刻蝕的容積也沒有問題，問題出在使用方法,。細胞計數(shù)的時候,，計數(shù)池上面加了一個蓋玻片,，細胞樣本是從計數(shù)板與蓋玻片之間的縫隙中加進去的。細胞液充滿計數(shù)池和計數(shù)池與蓋玻片之間的空隙,，這個空隙中的細胞也進入計數(shù)池,。因此計數(shù)的細胞體積應(yīng)該是計數(shù)池的體積加上空隙體積?？障扼w積是多大,，不知道，計算細胞密度的時候都不計算內(nèi),，被忽略掉了,，所以細胞計數(shù)板計數(shù)的細胞密度不準確?？p隙體積很小,，但相對于只有0.1微升的計數(shù)池體積，影響是很大的,，可能達到15%或更大,，所以是不可以忽略掉的。計數(shù)池容積太小和加蓋玻片是細胞計數(shù)板的致命傷,。

細胞計數(shù)板是細胞計數(shù)方法,，優(yōu)點是簡單、方便,，計數(shù)細胞真實,，數(shù)量準確。缺點是計量體積不準確,，計數(shù)結(jié)果不準確,，另外計數(shù)的細胞無法回收使用和細胞數(shù)量少于10萬的樣本無法計數(shù)也是問題。

細胞自動計數(shù)分析儀(Cellometer )是最近推出來的細胞計數(shù)方法,。Cellometer的問題比較大,。Cellometer是基于圖像分析的細胞計數(shù)儀。計數(shù)原理類似與血球計數(shù)板,，只是用儀器攝像代替人眼觀察細胞計數(shù),。加20ml樣本到計數(shù)儀計數(shù)板的樣品室內(nèi)，使細胞平鋪為單層細胞,，將計數(shù)板放入計數(shù)儀內(nèi),，通過儀器攝像頭選擇一個視野，記錄視野內(nèi)的細胞,。該儀器的細胞計數(shù)方法沒有記錄樣品室內(nèi)的全部細胞,，只是選取樣品室內(nèi)細胞分布的一個視野進行計數(shù)。儀器設(shè)定的視野面積近似于血球計數(shù)板一個白細胞計數(shù)單位的面積,，沒有考慮樣品深度,，而且顯微鏡視野面積受放大倍數(shù)影響,，面積和深度都不確定，體積更是問題,，體積不準確,，計數(shù)出來的細胞濃度不會準確。因此Cellometer細胞計數(shù)方法可信度很低,。

流式細胞計數(shù)儀,，以B.Dtc20-automated-cell-counter 為例，是臨床醫(yī)學應(yīng)用比較多的細胞計數(shù)方法,。這是一種基于庫爾特原理的細胞計數(shù)儀,。庫爾特原理認為，懸浮在電解液中的顆粒隨電解液通過小孔管時,，取代相同體積電解液,，導致小孔管內(nèi)外兩電極間電阻發(fā)生瞬時變化，產(chǎn)生電位脈沖,，脈沖信號的大小和次數(shù)與顆粒的大小和數(shù)目成正比,。這類細胞計數(shù)儀是根據(jù)細胞通過小孔引起電位變化計算細胞個數(shù)。儀器根據(jù)細胞體積大小設(shè)定脈沖信號上下限,，在上下限之間的顆粒信號作為細胞記錄，大于上限和小于下限的顆粒信號不作為細胞記錄,，與顆粒的顏色,、形狀、性質(zhì)無關(guān),。這種計數(shù)方法不能區(qū)分細胞與非細胞顆粒,，體積與細胞大小相同的非細胞顆粒也作為細胞記錄下來，非細胞顆粒造成假陽性細胞,，大于和小于設(shè)定孔徑的細胞不作細胞計數(shù)造成假陰性,。這類細胞計數(shù)儀的優(yōu)點是，自動化程度高,，快速方便,，樣本體積計量準確；主要問題是存在假陽性和假陰性問題,，誤差比較大,，計數(shù)的細胞密度準確度或真實性不高，而且檢測的細胞數(shù)量不能太少,，細胞不能回收使用,。該方法用于臨床檢驗（要求準確度不高）還可以，但不適合細胞學實驗,。

4. 細胞計數(shù)問題的解決辦法
上面介紹的三種類型細胞計數(shù)方法,，涵蓋了現(xiàn)代生物醫(yī)學領(lǐng)域細胞計數(shù)的基本技術(shù)和方法,。細胞計數(shù)是要獲得一個準確的細胞密度。細胞密度是單位體積內(nèi)的細胞數(shù)量,。計數(shù)細胞樣本的體積準確,，細胞數(shù)準確，密度才會準確,。三種細胞計數(shù)方法,，要么計數(shù)樣本體積不準確（血球計數(shù)板，自動細胞計數(shù)儀）,，要么細胞計數(shù)不準確（流式細胞儀）,，所以細胞計數(shù)結(jié)果都不夠準確。