為防干裂,出廠前透析袋一般都經(jīng)10%的甘油處理,,透析袋中含有微量的硫化物,、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì),它們對(duì)蛋白質(zhì)和其他生物活性物質(zhì)有害,,用前必須除去,。新購(gòu)進(jìn)的普通型透析袋必須經(jīng)過處理才能使用。處理方法如下,。
方法一:
把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度(10-20cm)的小段,。
在大體積(500ml)的2%(w/v)的碳酸氫鈉和1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中將透析袋煮沸10min,。
用蒸餾水清洗透析袋。
放在500ml的1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中將之煮沸10min,。
冷卻后,,置于30%或者50%的酒精中,放于4℃冰箱,,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi),。從此時(shí)其取用透析袋必須戴手套。
在使用前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗干凈,。
方法二:
可先用50%乙醇煮沸1h,,再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氫鈉和1mmol/L EDTA(pH=8.0)溶液洗滌,,最后用蒸餾水沖洗即可使用,。
方法三:
實(shí)驗(yàn)要求不高的可以用簡(jiǎn)易方法處理。用沸水煮5至10min,,再用蒸餾水洗凈,,即可使用。
不過現(xiàn)在也有雜質(zhì)含量極少,,無(wú)需預(yù)處理,,只需用去離子水清洗即可使用的即用型透析袋。這種透析袋具有特殊的生物技術(shù)膜,,不含硫化物及金屬雜質(zhì),。只是比普通型透析袋稍貴。
3)透析袋濃縮樣品
大多數(shù)情況下,,透析袋純化的樣品會(huì)被稀釋,。如果下游需要的樣品濃度比較高時(shí),可能需要對(duì)樣品進(jìn)行濃縮,。透析袋本身濃縮的方法如下,。
(1)吹干濃縮法: 將蛋白溶液裝入透析袋內(nèi),放在電風(fēng)扇下吹,。此法簡(jiǎn)單,,但速度慢,且溫度不能過高,,最好不要超過15℃,。
(2)透析袋濃縮法: 利用透析袋濃縮蛋白質(zhì)溶液是應(yīng)用的一種。將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋(無(wú)透析袋可用玻璃紙代替),,結(jié)扎,,把高分子(6000-12000)聚合物如聚乙二醇(碳蠟)、聚乙/烯吡/咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可,。也可將吸水劑配成30%-40%濃度的溶液,,將裝有蛋白液的透析袋放入即可。吸水劑用過后,,可放入溫箱中烘干或自然干燥后,,仍可再用。
主要用于更換蛋白質(zhì)的緩沖液,,得有透析袋,。不需要特殊的儀器。一般用得是PEG20000進(jìn)行實(shí)驗(yàn),,簡(jiǎn)單,,快速,對(duì)蛋白沒什么影響,。
此外,,還有其他的樣品濃縮方法,如冷凍干燥濃縮法,、超濾膜濃縮法等,。
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