血清淀粉酶（AMY）活性檢測(cè)試劑盒 (碘-淀粉比色法)

（微量法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1930

產(chǎn)品規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品簡介：

血清淀粉酶( Serum amylase，AMY) 屬于α-淀粉酶，以無規(guī)則方式水解多糖分子內(nèi)部的α-1,4糖苷鍵,，生成寡聚糖,、麥芽糖和葡萄糖的混合物,。AMY主要由唾液腺和胰腺分泌,，另外近端十二指腸,、肺,、子宮,、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌,。

AMY催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解，產(chǎn)生葡萄糖,、麥芽糖以及糊精等,，碘可以與未被水解的淀粉結(jié)合， 生成在570nm下有特征吸收峰的復(fù)合物,，其深淺可計(jì)算出淀粉酶的活力單位,。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè),。

產(chǎn)品組成：

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入12.5mL試劑二,，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌粉劑至溶解,；用不完的試劑2-8℃保存1個(gè)月,。

2. 試劑三的配制：將試劑三A倒入試劑三B中，用蒸餾水定容至10mL,，2-8℃避光保存一個(gè)月,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg淀粉標(biāo)準(zhǔn)品。臨用前加10mL試劑二,，置于常溫水中并加熱至煮沸,，配成1mg/mL淀粉標(biāo)準(zhǔn)液。用不完的試劑2-8℃保存1個(gè)月,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器,、蒸餾水,。

操作步驟：

一、粗酶液提取 

取40μL血清和160μL蒸餾水混合（即將血清稀釋5倍）,，分為2管100μL分別作為測(cè)定管和對(duì)照管,。若實(shí)驗(yàn)后所測(cè)數(shù)值偏大或者偏小，可以調(diào)整稀釋比例（比如數(shù)值偏小可以將80μL血清和120μL蒸餾水混合即將血清稀釋2.5倍）

二,、測(cè)定步驟和加樣表

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至570nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 將淀粉標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.5,、0.4、0.2,、0.1,、0.05,、0.025、0.0125,、0.00625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,。

3. 按操作表依次加入各試劑：

混勻后吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中，于15min內(nèi)讀取測(cè)定管,、對(duì)照管,、空白管1、標(biāo)準(zhǔn)管,、空白管2在570nm下的吸光度,，分別記為A測(cè)定、A對(duì)照,、A空白1,、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白2，計(jì)算ΔA測(cè)定=（A空白1-A空白2）-（A測(cè)定-A對(duì)照）,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白2,。

三、AMY活性計(jì)算 

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，得到方程y=kx+b,。將ΔA測(cè)定帶入方程得到x （mg/mL）。  

2. 按照血清體積計(jì)算：

單位定義：每mL血清每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個(gè)酶活性單位,。

AMY活性 (U/mL)= x×V樣÷V樣÷T×F =0.1×x×F

V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.1mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，10min,；F：稀釋倍數(shù)。

注意事項(xiàng)：

1. ΔA測(cè)定大于1.5時(shí),，可以對(duì)樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后測(cè)定,。

2. 反應(yīng)完成后需在15min內(nèi)測(cè)定吸光度。