培養(yǎng)基為什么偏紫色

為了方便觀察和感知培養(yǎng)液的狀況,，我們可以在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。酚紅指示劑對于pH值在6-8范圍內(nèi)非常敏感，呈現(xiàn)出從黃色到紫紅色的變化。當(dāng)培養(yǎng)液偏酸時,，酚紅會呈現(xiàn)偏黃色,；而當(dāng)培養(yǎng)液偏堿性時,，酚紅會呈現(xiàn)偏紫色,。

通常情況下,，當(dāng)培養(yǎng)液變成黃色時，這可能是由于細(xì)菌或細(xì)胞過度增長,，產(chǎn)生了酸性物質(zhì),。而當(dāng)培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中，二氧化碳會逐漸溢出,，導(dǎo)致pH偏堿性,，從而使培養(yǎng)基呈現(xiàn)偏紫色。對于呈現(xiàn)偏紫色的培養(yǎng)基,，我們可以通過通入經(jīng)無菌過濾的二氧化碳來調(diào)整pH值后繼續(xù)使用,。

然而，長時間未使用完的堿性培養(yǎng)基不建議繼續(xù)使用,，因?yàn)樗赡軐?dǎo)致細(xì)胞生長停滯或死亡,。以上是針對培養(yǎng)液顏色變化的一些解釋和建議。根據(jù)具體情況,，可能需要進(jìn)一步調(diào)整和優(yōu)化處理方法。

細(xì)胞培養(yǎng)的注意問題

1. 在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入HEPES可以穩(wěn)定液體的pH值,。HEPES的全稱是N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid,，它是一種氫離子緩沖劑，可以在較長時間內(nèi)維持恒定的pH范圍,。HEPES對細(xì)胞沒有毒性作用,，一般的細(xì)胞培養(yǎng)液中含有20mmol/L的HEPES即可達(dá)到緩沖能力。

2. 使用培養(yǎng)基顏色變化作為換液的指標(biāo)是一個實(shí)用但不準(zhǔn)確的方法,。在培養(yǎng)液中加入了指示劑酚紅,，液體的顏色變化可以間接提示細(xì)胞生長的狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞生長旺盛時,，會產(chǎn)生酸性物質(zhì),，導(dǎo)致液體呈黃色；相反,，液體會呈紫紅色,。但是，僅憑顏色變化來判斷細(xì)胞生長狀態(tài)是不夠的,，還需要結(jié)合其他指標(biāo)進(jìn)行細(xì)胞觀察和評估,。

3. pH值變化大會對細(xì)胞產(chǎn)生傷害，不利于細(xì)胞生長,。

4. 不是所有的細(xì)胞培養(yǎng)基都適用相同的CO2濃度,。CO2濃度的選擇取決于培養(yǎng)基中NaHCO3的濃度,。CO2和溶液中的HCO3-形成緩沖體系，使整個培養(yǎng)體系的pH值維持在弱堿性（約為7）,。當(dāng)培養(yǎng)基暴露在空氣中時,，HCO3-會迅速分解，導(dǎo)致pH值快速升高,，從紅色變?yōu)樽仙?。?dāng)將培養(yǎng)基放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中，在CO2的作用下,，pH值會緩慢地從紫色變回紅色,。

不同細(xì)胞培養(yǎng)基的NaHCO3濃度不同，使用不同細(xì)胞培養(yǎng)基時應(yīng)選擇相應(yīng)的CO2濃度,。具體選擇的CO2濃度如下：

當(dāng)NaHCO3濃度<1.5g/L時,，所需CO2濃度為4%；當(dāng)NaHCO3濃度處于1.5-2.2g/L之間時,，所需CO2濃度為5%,；

當(dāng)NaHCO3濃度處于2.2-3.4g/L之間時，所需CO2濃度為7%,；

當(dāng)NaHCO3濃度>3.5g/L時,，所需CO2濃度為10%。

當(dāng)我們發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液的pH值在細(xì)胞不斷生長過程中發(fā)生異常變化時,，我們應(yīng)該采取以下措施：

1. 檢查二氧化碳濃度是否適當(dāng)：根據(jù)培養(yǎng)基中的碳酸氫鈉濃度,，調(diào)整培養(yǎng)箱中二氧化碳的百分比。對于2.0至3.7 g/L的碳酸氫鈉,，使用5-10%的二氧化碳濃度,。或者考慮使用不依賴二氧化碳的培養(yǎng)基,。

2. 檢查培養(yǎng)瓶蓋是否太緊：將瓶蓋松開1/4圈,。

3. 確保碳酸氫鹽緩沖充分：加入HEPES緩沖液，使最終濃度達(dá)到10-25 mM,。

4. 檢查培養(yǎng)基中的鹽是否正確：在CO2條件下使用Earle's鹽培養(yǎng)基,，在常氣環(huán)境下使用Hanks'鹽培養(yǎng)基。

5. 檢查是否有細(xì)菌,、酵母或真菌污染：將培養(yǎng)物和培養(yǎng)基丟棄,，嘗試去除污染的培養(yǎng)物。以上是處理培養(yǎng)液pH異常變化的一些常見方法,，根據(jù)具體情況,，可能需要進(jìn)一步調(diào)整和優(yōu)化處理方法。