熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收,、運輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等,。 對被檢物體來說,,熒光產(chǎn)生方式有兩種:自發(fā)熒光,經(jīng)過紫外照射直接發(fā)出熒光,;繼發(fā)熒光,,被觀察物體經(jīng)過熒光染料處理之后,經(jīng)過紫外光照射才能發(fā)出熒光,。 細(xì)胞中有些物質(zhì),,如葉綠素等,受紫外線照射后產(chǎn)生自發(fā)熒光,;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)出繼發(fā)熒光,。 熒光顯微鏡利用一個高發(fā)光效率的點光源,,經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(紫外光365nm或紫藍(lán)光420nm)作為激發(fā)光,、激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后,再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察,。 這樣在強烈的對襯背景下,,即使熒光很微弱也易辨認(rèn),敏感性高,,主要用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分等的研究,。
熒光顯微鏡分為透射式和落射式兩類,前者較為原始,,后者較為*,。 兩類熒光顯微鏡的基本構(gòu)建相似,主要區(qū)別為:透射式的激發(fā)光透過標(biāo)本,,標(biāo)本整體產(chǎn)生熒光,,熒光再進入物鏡,放大倍數(shù)越高,,熒光越弱,;落射式的激發(fā)光投射在標(biāo)本表面,標(biāo)本表面產(chǎn)生熒光,,熒光再進入物鏡,,放大倍數(shù)越高,熒光越強,,適于進行高倍觀察,。 熒光顯微鏡主要構(gòu)件有汞燈光源、激發(fā)濾板,、分色鏡(落射式),、壓制濾板、暗場聚光鏡(透射式)等,。此外,,由于汞燈發(fā)熱嚴(yán)重,大多還裝有吸熱濾鏡,。 部分熒光顯微鏡還有相差物鏡和環(huán)狀光闌,,因此可以進行相差觀察。 還有的熒光顯微鏡采取倒置構(gòu)架,,又是倒置顯微鏡,,等等。
此外,,上述顯微鏡都可以通過安裝CCD組裝成數(shù)碼顯微鏡,,它是將顯微鏡看到的實物圖像通過數(shù)模轉(zhuǎn)換,使其成像在計算機上,。 從而,,我們可以對微觀領(lǐng)域的研究從傳統(tǒng)的普通的雙眼觀察到通過顯示器上再現(xiàn),,從而提高了工作效率。
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