原代培養(yǎng)是直接從生物體組織或器官的一部分進(jìn)行培養(yǎng),，也稱初代培養(yǎng),。腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)為腫瘤研究及治療提供充足的細(xì)胞來源是癌癥在體外研究的重要工具,，與體內(nèi)研究相輔相成。但目前腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)成功率不高的許多問題還需繼續(xù)探討與研究,。腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng),？讓我們一起來看看吧！

注意點(diǎn)一：取材部位的選擇非常重要,，應(yīng)在癌細(xì)胞集中,、細(xì)胞活力較好的部位取材，盡量避免在壞死區(qū)取材,；

注意點(diǎn)二：取材后應(yīng)盡快培養(yǎng),，最好不要超過24h,，如需耽擱時(shí)間，可將組織塊于培養(yǎng)液中浸泡,，放置于冰浴或4℃冰箱,；

注意點(diǎn)三：癌組織周圍的血液、脂肪等正常的組織應(yīng)去除,，可以保證癌細(xì)胞的純度,；

注意點(diǎn)四：取材方法：獲取的組織塊最好能有指尖大小，太小了可能養(yǎng)不起來,，因?yàn)榧?xì)胞有生物學(xué)環(huán)境,，細(xì)胞多了長得也會(huì)快，如果細(xì)胞密度太低了,，細(xì)胞很難長起來,，可能的原因是細(xì)胞分泌的生長因子。

注意點(diǎn)五：切碎癌組織時(shí),，可用眼科剪,，也可用小刀，避免用大剪刀,，所用刀剪要鋒利,，以免挫傷細(xì)胞。

注意點(diǎn)六：分散細(xì)胞的方法：機(jī)械和藥物兩種方法,。癌組織不同與正常組織,，單純用機(jī)械的剪碎辦法，癌細(xì)胞就可以游離出來,，成為細(xì)胞懸液,。常用胰蛋白酶、EDTA消化分離,。如果從含有大量堅(jiān)硬的結(jié)締組織分離癌細(xì)胞,，膠原纖維不能被胰蛋白酶和EDTA消化，則使用膠原蛋白酶消化,，如：原代黑色素瘤細(xì)胞,，黑色素瘤一般長在肢端，肢端的角質(zhì)層太厚,，就需要膠原蛋白酶消化,。

注意點(diǎn)七：接種數(shù)量要足夠，造成培養(yǎng)細(xì)胞所必須的生物學(xué)環(huán)境,；

注意點(diǎn)八：更換培養(yǎng)液的時(shí)可換半量或1/4量,，將pH維持在7.2-7.4；

注意點(diǎn)九：新配試劑要做無菌實(shí)驗(yàn),，嚴(yán)格無菌操作,，防止污染,，新手建議不要直接養(yǎng)原代,，先拿實(shí)驗(yàn)室的腫瘤細(xì)胞養(yǎng)養(yǎng)練練手,；

注意點(diǎn)十：若組織在消化時(shí)間較長時(shí)仍未散開，可采用多次提取消化法以減少酶對已消化下來的細(xì)胞的損傷,；

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