凍干粉針劑是先將無菌藥品溶液迅速降溫，再真空加熱,，通過升華的方式除去水分,，制備成凍結(jié)狀態(tài)良好的無菌粉注射劑。由于冷凍干燥在低溫下進行,，對于許多熱敏性的物質(zhì)特別適用,。蛋白質(zhì)、微生物類通過凍干過程不會失去生物活力或發(fā)生變性,，因此凍干粉針劑在醫(yī)藥行業(yè)得到廣泛地應(yīng)用,。由玻璃西林瓶、膠塞,、鋁塑蓋組成的包裝密閉系統(tǒng)是凍干粉針劑常見的包裝形式。

凍干粉針劑包裝密閉系統(tǒng)的完整性可以防止內(nèi)容物損失,、微生物侵入以及氣體（氧氣,、空氣、水蒸氣等）或其他物質(zhì)進入,，保證藥品持續(xù)符合安全與質(zhì)量要求的能力,。美國藥典USP1207.2中介紹了6種確定性的包裝密封性檢查方法，其中真空衰減法和壓力衰減法都是定量測試方法,，文獻報道檢出限級別均在3級（泄漏孔徑＞1.0~5.0 μm）,。目前，真空衰減法較多使用于西林瓶組成的包裝系統(tǒng)的微泄漏測試,，泄漏部位必須有氣體或液體存留,，泄漏部位存在液體時測試壓力需低于蒸氣壓，不適用含顆粒物的懸濁液或乳狀液及微頂空高粘度的液體。如果內(nèi)容物是粉末,，會產(chǎn)生堵塞泄漏通道的風(fēng)險,。

由于凍干粉針劑的加工工藝，某些成品頂空接近極限真空,，內(nèi)容物為餅狀固體,。如果包裝系統(tǒng)發(fā)生泄漏，瓶內(nèi)真空度會發(fā)生改變,，選用真空衰減測試此類產(chǎn)品,，可能會因沒有建立有效壓差，出現(xiàn)假陰性的測試結(jié)果,。本次測試采用壓力衰減法,，設(shè)置有效的測試參數(shù)，通過模擬泄漏建立線性關(guān)系,，測試陰性實體和激光打孔陽性樣品進行準(zhǔn)確度驗證,。結(jié)果表明，該法靈敏度高,，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確,，可有效檢測凍干粉針劑的密封性。

一,、材料與方法

1.1 儀器與材料
AUTO GBM-L2 雙壓法微泄漏密封測試儀,，廣州標(biāo)際包裝設(shè)備有限公司；10 mL西林瓶鋼制實心陰性實體,，廣州標(biāo)際包裝設(shè)備有限公司,；10 mL陽性樣品（激光打孔，有證校準(zhǔn)孔徑為1.959 μm,、3.394 μm,、4.689 μm），zillion提供,；FCO 220氣體流量計,，F(xiàn)urness Controls Limited；凍干粉針劑（頂空真空度在1Pa以下）,，規(guī)格為10mL,，某客戶送樣。
1.2 研究方法
被測樣品放入特制腔體,，鎖緊腔蓋,，儀器對測試腔充入預(yù)定氣壓，系統(tǒng)平衡后,，在預(yù)定的時間內(nèi)監(jiān)測到測試腔內(nèi)的壓力下降,，如果壓力下降值超過設(shè)定的閾值,，則表明樣品泄漏。反之,，則判定無泄漏,。本次使用的檢測設(shè)備為AUTO GBM-L2 雙壓法微泄漏密封測試儀，見圖1,。針對待測樣品,，參數(shù)設(shè)定如下：目標(biāo)壓力：200000 Pa。循環(huán)1的平衡時間5s,，測試時間5s,；循環(huán)2的平衡時間：10s，測試時間15s,。

圖1  AUTO GBM-L2 雙壓法微泄漏密封測試儀

二,、線性及范圍
氣體流量計與腔體有連接，打開連接通道時,，可以向系統(tǒng)釋放一定體積的微小氣流,，可為模擬泄漏，見圖2,。把10mL的陰性實體放入腔體,，蓋好上腔蓋，打開氣體流量計,，調(diào)整5個不同氣體流量,，分別測得不同流量下的壓力衰減值。以引入泄漏量為X軸,，對應(yīng)的測的差壓值為Y軸作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。線性回歸方程為：y = 840.55x + 104.15，R=0.9999,，接收準(zhǔn)則為R＞0.999,，表明0.039 mL/min~1.485mL/min范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2 氣體流量計

三,、陰性樣品與陽性樣品驗證
判定包裝系統(tǒng)是否有泄漏的重要參照物是陰性對照,，設(shè)計采用316不銹鋼材質(zhì)制作與被測樣品外形、體積尺寸相同的實心體,，作為陰性對照樣品。把陰性樣品放到測試腔進行測試,，連續(xù)測試10次,，均值為104 Pa，RSD=0.89%,。陰性樣品的重復(fù)性良好 ,，測試結(jié)果為無泄漏。陰性樣品見圖3。 

圖3 陰性對照樣品

陽性樣品的制備采用激光打孔制備技術(shù),，其漏孔幾何形狀和內(nèi)部氣體流動行為真實缺陷,，打孔位置在瓶身。把陽性樣品放入測試腔進行測試,，通過陽性樣品的標(biāo)示孔徑與儀器測試推算出來的孔徑做對比,，來驗證儀器的準(zhǔn)確度。陽性樣品見圖4,，測試結(jié)果見表1,。

圖4 激光打孔陽性對照品

表1 陽性瓶驗證測試系統(tǒng)準(zhǔn)確性結(jié)果

由表1可知，標(biāo)示孔徑為1.959 μm,、3.394 μm,、4.689 μm的陽性樣品均能100%識別，偏差在0.5μm以內(nèi),，方法準(zhǔn)確度良好,。

四、樣品測試
方法建立以及驗證通過后,，把3個待測樣品分別放入測試腔內(nèi),，旋緊上腔蓋，進行測試,，測出樣品的參考壓力值和壓力衰減值,。孔徑為2μm的激光打孔樣品的壓力衰減值為170Pa＞104Pa,，與無泄漏的陰性實體有良好的區(qū)分度,。選擇2.0μm標(biāo)準(zhǔn)點作為閾值，樣品測試結(jié)果為合格,。測試樣品見圖5,，測試結(jié)果表2。

五,、討論與分析
（1）針對此次測試的10mL凍干粉針劑,，壓力衰減法在AUTO GBM-L2 雙壓法微泄漏密封測試儀中的檢出限在2 μm，達到《化學(xué)藥品注射劑包裝系統(tǒng)密封性研究技術(shù)指南》中文獻報道檢出限＞1.0~5.0 μm級別,，優(yōu)于微生物挑戰(zhàn)法,，滿足包裝系統(tǒng)密封性的檢測需求。
（2）以上方法建立是基于測試樣品進行的開發(fā)及驗證,，不具有通用性,。針對不同的測試樣品，需根據(jù)樣品實際尺寸設(shè)計緊密貼合的腔體與陰性對照樣品,，再進行方法開發(fā)及驗證,。重點需要驗證方法的測試靈敏度,。
（3）陽性樣品屬易耗品，研究表明,，1 μm的激光打孔極容易被環(huán)境的灰塵雜質(zhì)堵塞,。多次重復(fù)性使用會導(dǎo)致測試結(jié)果不準(zhǔn)確。YY/T0681.18中表明需使用氣體流量計連接測試腔體,，用于引入不同速率的人為泄漏,，驗證泄漏測試的靈敏度。
（4）藥物制劑產(chǎn)品眾多,，真空衰減法作為無損,、快速、定量的檢測方法,，廣泛應(yīng)用于凍干粉針劑,、滴眼液、BFS,、預(yù)充針等樣品的微泄漏檢測,。此法有一定的局限性，不適用含顆粒物的懸濁液或乳狀液及微頂空高粘度的液體,。如果內(nèi)容物是粉末,，會產(chǎn)生堵塞泄漏通道的風(fēng)險。
（5）壓力衰減法和和真空衰減法的核心測試條件之一是需要在樣品內(nèi)外建立有效的壓差,。凍干粉針劑頂空常為負壓或者氮氣,，在測試方法選擇上需注意能否建立有效壓差，以確保測試的有效性,。高效定量檢測包裝系統(tǒng)密封性建議選用真空衰減/壓力衰減測試方法結(jié)合的測試儀器,，可以打破單一測試方法的局限性，適應(yīng)范圍更廣,，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確有效,。