一,、概念

電化學發(fā)光 (Electrochemiluminescence ) 是繼放射免疫,、酶免疫、熒光免疫,、化學發(fā)光免疫測定以后的新一代標記免疫測定技術。電化學發(fā)光法是一種在電極表面由電化學引發(fā)的特異性化學發(fā)光反應,，包括了電化學和化學發(fā)光兩個過程,。電化學發(fā)光 (Electrochemiluminescence ) 可以應用于所有的免疫測定，電化學發(fā)光能取代第一代放射免疫的靈敏度,，又繼承了第二代酶聯(lián)免疫的通量方便,，因而廣泛被全球大量用戶所認可和使用，從被載入了免疫分析技術發(fā)展的史冊,。

免疫分析技術發(fā)展的三代

二,、MSD電化學發(fā)光原理

MSD（Meso Scale Discovery）的電化學發(fā)光技術是基于Elisa原理的升級，在96/384微孔板（石墨材質,，背面帶有電路）的板底包被捕獲抗體,，加入待測樣本，加入三聯(lián)吡啶釕標記的檢測抗體,，形成雙抗體夾心復合物,，將微孔板放入MSD儀器中，微孔板通電后,，三聯(lián)吡啶釕發(fā)生化學反應,， 由[Ru(bpy) 3 ] 3+變成 [Ru(bpy) 3 ] 2+，再回到[Ru(bpy) 3 ] 3+,，并且這個循環(huán)反應可以持續(xù)進行,，在此過程中會釋放出光子（620nm檢測）被儀器中的CCD相機捕獲，釋放出的光子和待測物的濃度成正比,。

三,、MSD多因子檢測原理

（1）MSD通過點陣技術，在96/384石墨電極板里的每個孔的不同spot中預先點印上1-10種捕獲抗體,，從而實現(xiàn)1-10個指標/每孔的檢測,。

通常MSD的V-PLEX試劑盒通過該方法實現(xiàn)多因子檢測,，下面是幾款經(jīng)典熱賣的試劑盒：

K15049D V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Human Kit

K15048D V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Mouse Kit

K15059D V-PLEX Proinflammatory Panel 2 Rat Kit

K15396S S-PLEX Proinflammatory Panel 1 (human) Kit（fg/mL靈敏度）

（2）借助linker將捕獲抗體帶到一個孔中的不同區(qū)域內(nèi)，在一個孔內(nèi)實現(xiàn)多因子檢測,。通常U-PLEX試劑盒就是通過該方法實現(xiàn)多因子檢測,。

1. Linker與捕獲抗體連接：

U-PLEX plate每個孔內(nèi)有1-10個spot，每個spot內(nèi)有基座分別與不同linker匹配,；linker有生物素結合區(qū)域,，可以結合生物素化的捕獲抗體。因此捕獲抗體可以被linker帶到相應的spot里,。

例如檢測四種指標,，第一步，將四種指標對應的生物素化捕獲抗體與四種linker,，分別在四支管子內(nèi)混合,，分別完成linker與捕獲抗體的偶聯(lián)，之后加入stop solution終止反應,。

2.  Linker帶著生物素化捕獲抗體到一個孔的不同區(qū)域：

將四種Linker連接的捕獲抗體混合制成混合液A,。

將混合液A包被U-PLEX plate，不同的Linker就會帶著連接的捕獲抗體到相應的spot中,，完成在同一個孔內(nèi)包被多種捕獲抗體,，實現(xiàn)在一個孔內(nèi)進行多指標檢測（最多可在一個孔中實現(xiàn)10種指標的同時檢測）

3.  后續(xù)流程同ELISA,，完成實驗

在板內(nèi)加入樣本進行孵育結合,；

準備四種指標的檢測抗體混合液（抗體帶sulfo-tag標記），加入板內(nèi)進行孵育結合,；

加入read buffer讀板液上機讀板檢測,，根據(jù)各個spot相應位置的光信號值，定量各檢測指標的濃度,。

通常MSD的U-PLEX試劑盒通過該方法實現(xiàn)多因子檢測,，可以在以下試劑盒中挑選感興趣的因子，自由組合在一塊板,，實現(xiàn)多因子檢測,。

四、電化學發(fā)光特點

·節(jié)約樣本用量（25uL）

·高靈敏度（fg/ml）

·寬線性范圍（5-6log）

·多因子檢測（10因子）

·高重復性

·降低基質效應

MSD電化學發(fā)光儀器

SQ120MM

S600MM

儀器特點：

1）fg/mL超高靈敏度

2）5-6個數(shù)量級超寬檢測范圍

3）5-25ul超微量檢測

4）適用不同復雜樣本基質（腦脊液,，不同抗凝劑處理的血漿,，細胞裂解液，細胞上清液等）

5）7大固相包被能力（多肽,，病毒表面顆粒,，懸浮細胞，抗體,，蛋白,，細胞膜,，細胞裂解液）

6）384孔板單孔檢測1-4指標能力，96孔單孔檢測1-10指標能力

7）3000多種開發(fā)/檢測試劑（抗體對,，標準品,，微孔板，試劑盒,，標記試劑,，標記二抗）

8）均衡的多物種檢測試劑盒（小鼠，大鼠,，猴子,，人等）

9）基于細胞水平的結合能力測試（懸浮細胞30分鐘直接貼壁微孔板底）

10）優(yōu)秀的中國及全球的應用科學家服務團隊，協(xié)助MSD用戶設計實驗方案

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