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做電泳實驗常見條帶問題分析詳解

來源:上海旦鼎國際貿(mào)易有限公司   2023年08月09日 19:53  

一、微笑形區(qū)帶(兩邊翹起,,中間凹下): 

        形成原因:主要是由凝膠中間部分凝固不均勻引起的,,多出現(xiàn)于較厚的凝膠中,。

        處理辦法:待其充分凝固再做實驗,。

二、皺眉形區(qū)帶(兩邊向下,,中間鼓起):

        形成原因:主要出現(xiàn)在蛋白質(zhì)垂直電泳槽中,,一般是由兩板之間的底部間隙氣泡未排除干凈引起的。

        處理辦法:可在兩板之間加入適量緩沖液,,以排除氣泡。

三,、區(qū)帶拖尾:

        形成原因:主要是由樣品溶解效果不佳或分離膠濃度過大引起的,。

        處理辦法:加樣前離心;選擇適當(dāng)?shù)臉悠肪彌_液,加適量樣品促溶劑,;電泳緩沖液放置時間過長,,重新配制;降低凝膠濃度,。

四,、區(qū)帶出現(xiàn)紋理:

        形成原因:主要是由樣品不溶性顆粒引起的。

        處理辦法:加樣前離心,,加適量樣品促溶劑,。

五、鬼帶:

        形成原因:主要是由于還原劑在加熱的過程中被氧化而失去活性,,致使原來被解離的蛋白質(zhì)分子重新折疊結(jié)合和亞基重新締合,,聚合成大分子,其分子量比目標(biāo)區(qū)帶大,,有時不能進(jìn)入分離膠,。但它與目標(biāo)區(qū)帶有相同的免疫學(xué)活性,在免疫印跡反應(yīng)中可見,,能與目標(biāo)區(qū)帶對應(yīng)的抗體作用,。

        處理辦法:加熱煮沸后再添加適量的DTT或Beta巰基乙醇,以補(bǔ)充不足的還原劑,;加適量EDTA來阻止還原劑的氧化,。

六、溴酚藍(lán)不能起到指示作用:

        形成原因:實驗中常遇到溴酚藍(lán)已跑出板底,,但蛋白質(zhì)卻還未跑下來的現(xiàn)象,,主要與緩沖液和分離膠的濃度有關(guān)。

        處理辦法:更換正確pH值的Buffer,,降低分離膠濃度,。

七、區(qū)帶很粗:

        形成原因:主要是由于濃縮膠未濃縮好,。

        處理辦法:適當(dāng)增加濃縮膠長度,,保證濃縮膠貯液的pH正確(6.8),適當(dāng)降低電壓,。

八,、電泳電壓很高而電流很低:

        形成原因:主要是由于電泳槽沒有正確裝配,電流未形成通路,。

        處理辦法:電泳槽正確裝配,。


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