組織勻漿的制備方法簡(jiǎn)介

來源：迪圖（上海）生物科技有限公司 2023年08月09日 19:49

1,、取組織塊（0.2g~1g）最少可到2～5mg,，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液,，濾紙拭干,，稱重，放入5或10ml的小燒杯內(nèi)

2,、用移液管量取預(yù)冷的勻漿介質(zhì)（ph7.4,0.01mol/L Tris-HCL, 0.0001MOL/LEDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖0.8％的氯化鈉溶液）或者用0.86％冷生理鹽水，勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍,，用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿介質(zhì)或生理鹽水于燒杯中,，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行，將盛有組織的小燒杯放入冰水中）,。

3,、勻漿的方式有多種：手工勻漿、機(jī)器勻漿,、超聲勻漿,、反復(fù)凍融。
手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,，再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿，左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,，右手將搗桿垂直插入套管中,，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次（6～8分鐘），充分研碎,，使組織勻漿化,。

機(jī)器勻漿：用組織研磨機(jī)（OMNIBead Ruptor 24 多樣品研磨珠均質(zhì)儀） 6m/s研磨制成10％組織勻漿,，也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備(Omni Prep 多樣品均質(zhì)儀 )勻漿時(shí)間20秒/次，間隙10秒,，連續(xù)3-5次,。
超聲粉碎：用超聲波細(xì)胞破碎儀(OMNI Sonic Ruptor400W)進(jìn)行破碎，可用以振幅12.7mm超聲處理30秒使細(xì)胞破碎.

反復(fù)凍融：培養(yǎng)或者分離的細(xì)胞可以用以上的方法勻漿,，也可以反復(fù)凍溶3次左右（即讓細(xì)胞加適量的低滲液或者雙蒸水放低溫冰箱中結(jié)冰,，溶解，再結(jié)冰,，再溶解,，反復(fù)3次左右），但有部分酶活力會(huì)受影響,。
取少量組織勻漿做涂片（直接涂片,、染色均可），顯微鏡下觀察細(xì)胞是否磨破,，若沒有破則可以延長(zhǎng)勻漿時(shí)間或增加凍融次數(shù),。

4、將制備好的10％勻漿用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)3000r/min左右離心10～15分鐘,，若檢測(cè)ATP酶,，則只需要1000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘,，將離心好的勻漿留下上清棄下面沉淀,。
根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種測(cè)定,。

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