近幾年來,隨著基因診斷技術(shù)的發(fā)展,,游離DNA的應(yīng)用價值越來越大,,如優(yōu)生篩查、腫瘤早期診斷,、遺傳病檢測和病原體感染基因檢測等。游離DNA是存在于血液(血漿或血清)、腦脊液等體液中的細(xì)胞外DNA,,也叫循環(huán)DNA。其主要是由單鏈或雙鏈DNA以及單鏈與雙鏈DNA的混合物組成,,以DNA和蛋白質(zhì)復(fù)合物或游離DNA兩種形式存在,。分析血液中腫瘤特異性的胞外DNA片段可對普通血液樣品進行特異性地腫瘤類型檢測。游離DNA提取試劑盒的操作手段你知道嗎,?
1. 請自行準(zhǔn)備:無水乙醇,、1.5mL離心管。
2. 取出洗滌液,,按以下操作:
a) 洗滌液A:21mL加入9mL無水乙醇,;42mL加入18mL無水乙醇。 b) 洗滌液B:9mL加入21mL無水乙醇,;18mL加入42mL無水乙醇,。 c) 配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀,可在37℃溶解,,搖勻后使用,。
3. 取1.5mL離心管,加入200μL樣本,,4μLDNA Carrier混合均勻,,加入300μL 裂解液及20μL 消化液,,振蕩混勻,56℃水浴10 分鐘,。
4. 加入1000μL無水乙醇,,輕輕顛倒混勻,如有半透明懸浮物,,不影響DNA的提取與后續(xù)實驗,。
5. 將吸附柱放入收集管內(nèi),將760μL上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi),,靜置2 分鐘,,12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內(nèi)廢液,;
6. 將吸附柱放回收集管內(nèi),,將剩余760μL溶液轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi),重復(fù)步驟5,。
7. 將吸附柱放回收集管內(nèi),,加500μL 洗滌液A至吸附柱內(nèi),12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,,棄收集管內(nèi)廢液,。
8. 將吸附柱放回收集管內(nèi),加500μL 洗滌液B至吸附柱內(nèi),,12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,,棄收集管內(nèi)廢液。
9. 將吸附柱放回收集管內(nèi),,12,000 rpm 4℃離心2 分鐘,,離去殘留的洗滌液。
10. 取出吸附柱,,放入新的1.5 mL 離心管內(nèi),,加入30-50 μL 洗脫液,靜置3 分鐘,,12,000 rpm 4℃ 離心2 分鐘,,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步實驗或-20℃保存,。
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