Triton X-100細(xì)胞裂解液 

產(chǎn)品貨號：T15196

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

產(chǎn)品簡介：

Triton X-100細(xì)胞裂解液是一種經(jīng)典的快速裂解細(xì)胞組織并獲得蛋白的裂解液,。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于 PAGE電泳,，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation,，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等,。Triton X-100、NaCl,、Tris-HCl 等組成,，并含有多種蛋白酶抑制劑成分，可以有效抑制蛋白的降解,，并維持原有的蛋白間相互作用,。作用原理是利用去污劑Triton X-100破壞脂質(zhì)雙分子層，溶解胞質(zhì)和細(xì)胞膜,，破壞分子間微弱結(jié)合鍵的大部分蛋白質(zhì)抗原,。其濃度在0.1%～1%時即可滿足幾乎所有溶解的需求,，且可補(bǔ)充等離子濃度的鹽及使pH接近中性。不宜用 Bradford法測定由Triton X-100 Lysis Buffer獲得樣本的蛋白濃度,。 

產(chǎn)品組成：

試劑名稱規(guī)格保存條件

Triton X-100 Lysis Buffer100ml-20℃

PMSF(100mM)1.5ml-20℃

操作步驟(僅供參考)：

(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞 

1.取Triton X-100 Lysis Buffer室溫溶解混勻,，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM,。 

2.去培養(yǎng)液,，用PBS、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次,，低速離心，棄上清,，留取沉淀,。 

3.按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Triton X-100 Lysis Buffer。移液器輕輕吹打,，使裂解液和細(xì)胞充分接觸,。置于冰上或4℃裂解，通常裂解液作用于細(xì)胞1～3s內(nèi),，細(xì)胞就會被裂解,。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl,。 

4.10000～12000g,，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可),，取上清,。 

5.進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western,、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作,。 

(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞 

1.取Triton X-100 Lysis Buffer室溫溶解混勻，加入PMSF,，使PMSF終濃度為1mM,。 

2.低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清,，收集沉淀,。 

3.用手指輕彈細(xì)胞，使其松散,。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例,，加入尚寶生物Triton X-100 Lysis Buffer。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠,，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl,。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。 

4.10000～12000g,，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī),，室溫下離心亦可)，取上清,。 

5.進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE,、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作,。 

(三)組織樣本 

1.取Triton X-100 Lysis Buffer 室溫溶解混勻后,，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM,。 

2.把組織剪切成細(xì)小的碎片,，越小越好。 

3.取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織,，迅速用液氮研磨,，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解,。 

4.按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液,。冰上或4℃裂解15～30min。 

5.步驟3,、4亦可以采用如下過程：按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton X-100 Lysis Buffer,。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解,，該過程盡量控制在1～2min之內(nèi),，以減少蛋白的降解。 

6.10000～12000g,，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī),，室溫下離心亦可)，取上清,。 

7.進(jìn)行后續(xù)的PAGE,、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作,。 

注意事項：

1.去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后,，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗,。 

2.如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量,，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量,。 

3.如果細(xì)胞量較多,，必需分裝成50～100萬細(xì)胞/離心管,，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分,，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸,，相對比較容易裂解充分。 

4.如果組織樣品本身非常細(xì)小,，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,，用于后續(xù)實驗,。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器,，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分,。 

5.溶解Triton X-100 Lysis Buffer時，應(yīng)盡量縮短溶解時間,，避免有效成分失效。 

6.裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物,。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗。如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,，例如NF-KB,、p53等時，通常不必進(jìn)行超聲處理,，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子,。 

7.細(xì)胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或4℃進(jìn)行,。

有效期：12個月有效,。