貼壁細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，但在實(shí)際操作過(guò)程中,，常常會(huì)遇到一些問(wèn)題,。下面將介紹貼壁細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的五大問(wèn)題,，并提供相應(yīng)的解決方法。

1. 傳代后部分細(xì)胞漂浮

原因及解決方法如下：

- 傳代前細(xì)胞密度太大：細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)可以進(jìn)行傳代操作,，傳代密度需要適中，密度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致傳代后細(xì)胞漂浮,。

- 細(xì)胞狀態(tài)不好：可以通過(guò)提高血清比例、保持穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境等方法改善細(xì)胞狀態(tài),。

- 吹打次數(shù)過(guò)多造成機(jī)械損傷：在吹打過(guò)程中要輕柔操作,，當(dāng)細(xì)胞呈單顆粒時(shí)可停止吹打,，避免產(chǎn)生氣泡,。

- 培養(yǎng)基更換后不適應(yīng)：可以將培養(yǎng)基換回原來(lái)使用的培養(yǎng)基，或者與原培養(yǎng)基比例混合后使用,，讓細(xì)胞有一個(gè)適應(yīng)期。

- 培養(yǎng)液配制和儲(chǔ)存不當(dāng),，如pH值過(guò)堿,、谷氨酰胺含量不足等原因：注意正確配制培養(yǎng)液并儲(chǔ)存好,，確保培養(yǎng)液的質(zhì)量。

2. 傳代后細(xì)胞變形

原因及解決方法如下：

- 變形但細(xì)胞仍在生長(zhǎng)：可能是血清批次不一樣導(dǎo)致的,，建議使用同一批次的血清,，若更換血清則需要與原血清混合并逐漸過(guò)渡,。

- 變形且細(xì)胞不長(zhǎng)且碎片增多：可能是傳代操作過(guò)程中的損傷，如消化不當(dāng)或細(xì)胞受到污染,。應(yīng)根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)調(diào)整消化時(shí)間,，嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作,，確保細(xì)胞無(wú)外源性污染。

3. 細(xì)胞生長(zhǎng)周期變慢,，邊養(yǎng)邊漂

原因及解決方法如下：

- 細(xì)胞傳代時(shí)密度太稀或太密：建議在細(xì)胞融合度達(dá)到80%左右進(jìn)行傳代,，傳代密度適度,，密度過(guò)低會(huì)延長(zhǎng)生長(zhǎng)周期，密度過(guò)高會(huì)造成細(xì)胞接觸抑制,。

- 傳代操作不當(dāng)：根據(jù)細(xì)胞特性調(diào)整消化時(shí)間,，觀察細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落后終止消化，頻繁換液和清洗細(xì)胞也會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài),，常規(guī)換液時(shí)間間隔為2-3天,。

4. 傳代后細(xì)胞成團(tuán)

解決方法如下：

- 低密度接種,，延長(zhǎng)換液時(shí)間，避免細(xì)胞脫落,。

- 使用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)器皿,，增加細(xì)胞貼壁的牢固度，減少細(xì)胞聚集成團(tuán)的幾率,。

- 重新鋪板,，并更換新配制的培養(yǎng)基，增加血清的比例但不超過(guò)5%,。

- 接種時(shí)減少培養(yǎng)基量，以加快細(xì)胞貼壁的速度,，等待細(xì)胞貼壁后再補(bǔ)加培養(yǎng)基到正常用量,。

5. 貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞出現(xiàn)空泡

原因及解決方法如下：

- 正常的細(xì)胞活動(dòng)：有些細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)正常的自噬行為或其他膜泡活動(dòng),，無(wú)需特殊處理。

- 細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良：可能是由血清不適應(yīng),、培養(yǎng)基成分改變或換液不及時(shí)等原因?qū)е碌?，可以通過(guò)更換適合的血清或及時(shí)換液來(lái)解決,。

- 細(xì)胞受損：注意培養(yǎng)條件和操作手法，避免機(jī)械損傷或pH值過(guò)高或過(guò)低等情況,。

通過(guò)了解這些常見(jiàn)的貼壁問(wèn)題及解決方法,，可以幫助科研人員在貼壁細(xì)胞培養(yǎng)中更好地處理各種技術(shù)難題，從而獲得高質(zhì)量的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果,。

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