色譜雙峰指的是明明是同一種物質(zhì),，但在色譜圖中卻呈現(xiàn)雙峰,，讓實驗人員誤認為含有兩種物質(zhì),。那么,，出現(xiàn)雙峰的原因主要有哪些呢？今天小編就和大家聊一聊,，液相色譜出現(xiàn)“雙峰”的原因,。

在HPLC分析中，在色譜柱正常,，樣品濃度適宜,，分析方法合適，色譜峰在出峰時間較短的條件下,，峰型應對稱而尖銳,。但在實際操作中，如果對樣品不了解,，前處理不恰當或者分析方法不合理等,，會出現(xiàn)峰形不正常的情況，其中雙峰現(xiàn)象就是液相色譜中常見的問題之一,。

出現(xiàn)色譜雙峰的原因一般有以下幾種原因：色譜柱的問題,、溶劑,、進樣量、樣品特性,，以及pH,。

色譜柱

如果在樣品分析時發(fā)現(xiàn)每個色譜峰都有雙峰出現(xiàn)，尤其在采用單一純物質(zhì)時,，則可以確定是色譜柱出現(xiàn)問題了,，一般是柱頭受損或者柱頭固定相污染引起的。

如果進樣量少,，原來色譜柱正常,，色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰，不一定拖尾,，這一般應是柱頭受堵,，將色譜柱反過來接，用流動相沖洗或酸洗或其它溶劑,，將堵在柱頭的殘留物沖掉,，再反過來，一般情況下就行了,。當然不反沖,，正沖有時也會正常的。如果峰拖尾,，雙峰強弱相差不大,，柱頭固定相變臟或流失可能性更大，這時可以將進樣頭擰開,，將微孔濾片超聲,，柱頭刮去一部分填料，重新填上新填料擰緊,，不過這個對技術要求較高且不能經(jīng)常做,，否則用不了幾次，色譜柱就會應柱效降低而報廢,。如果上述不能解決問題,，可能是柱塌陷造成的，此時需要更換色譜柱,。

溶劑問題

目前HPLC分析多為反相色譜,，流動相多為甲醇、乙腈,、水，加各種添加劑以改善分離性能,。樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解,，最佳的溶解方法是用流動相溶解,。在實際分析中，有時候為了樣品的溶解性或穩(wěn)定性加入了一點的緩沖液,，緩沖液的酸堿性可能會導致樣品轉化,，從而產(chǎn)生雙峰現(xiàn)象。此時需要更換緩沖液,，調(diào)整溶劑pH值,，或者用流動相配置樣品。

此外,，樣品要現(xiàn)配現(xiàn)用,，避免樣品溶解液的有機相比例、pH值發(fā)生變化而導致的溶劑效應,。

進樣量

當用溶劑極性強度大的試劑,，如純甲醇、純乙腈,，純乙醇,，而分析體系中以水為主時，如果樣品進樣量大,，如定量管為20ul,，此時單一的純物質(zhì)會出現(xiàn)雙峰，第二峰比第一峰小(每次都不太一樣),，且拖尾,，保留時間會提前(相對進樣量少而言)，將進樣量減少一半以上,，峰型將變?yōu)檎,！?/span>這是樣品的溶劑與流動相極性相差太大，而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的,，此情況下需要減少進樣量,。

另一個原因是，進樣量不一定大,，但絕對量很大,，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高,，不拖尾(如果出峰很快,，也可能是色譜柱問題)。將樣品稀釋再進樣就可以了,，這是由于進樣量過大,，色譜柱過載造成的。

樣品特性

有些樣品由于其化學結構的特點,，存在互變異構現(xiàn)象,，而這種互變異構體無法分開,，而是以一個動態(tài)平衡存在。在色譜分析時,，在一個特定的條件下(如pH值,、流動相極性、溫度等),，一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰,，雙峰靠的很近，基本齊高,，不拖尾,，條件稍一變化，尤其pH,，雙峰現(xiàn)象將消失,，如紅霉素等。

有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰,，但在LC-MS下,，用質(zhì)譜檢測器，其質(zhì)譜的總離子流圖上較明顯,，如農(nóng)藥啶蟲瞇(吡蟲清),。

pH值

體系pH值對色譜雙峰的影響出現(xiàn)在各個環(huán)節(jié)上(前面已經(jīng)提到)，尤其在緩沖液流動相平衡過程中其影響更為明顯,。當連續(xù)進樣時,，受pH的連續(xù)變化影響會經(jīng)常遇到這種雙峰的情況。另外,，在樣品分析時,，流動相的pH盡量遠離被分析物的等電點，否則也容易引起雙峰的產(chǎn)生,。在用離子對試劑分析時,，選擇不好條件也會容易引起雙峰的產(chǎn)生。

HPLC分析中,，在色譜柱正常,，樣品靈敏度足夠，分析方法合適,，色譜峰在出峰時間較短的條件下（不包括梯度）,，峰型應對稱而尖銳。但是,，在對樣品了解程度不夠,，方法不妥，樣品處理方法及進樣方式不合理下，會出現(xiàn)各種意想不到的問題,，而對色譜峰難以作出合理的解釋,，尤其對于新手更是如此,，所以,，了解每種鬼峰出現(xiàn)的原因?qū)ξ覀兊姆治龉ぷ魇欠浅Ｖ匾摹?/span>