細(xì)胞復(fù)蘇和凍存講究“慢凍快溶”,，復(fù)蘇時(shí)一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細(xì)胞凍存液快速融化至37℃，使胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化,，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,，對細(xì)胞造成損害。

實(shí)驗(yàn)材料：

離心管,、細(xì)胞培養(yǎng)瓶,、移液管

實(shí)驗(yàn)步驟：

●打開水浴鍋加熱至37℃,。

● 超凈臺上放好離心管（離心管規(guī)格選用15ml的），細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，移液管,，紫外滅菌至少20至30分鐘，吹風(fēng)5至10分鐘除去臭氧,。

● 37℃預(yù)熱好要復(fù)蘇細(xì)胞的培養(yǎng)液,，也可以不用預(yù)熱培養(yǎng)液，根據(jù)細(xì)胞情況選擇,。

●向離心管中加約5至10ml培養(yǎng)液,，從液氮罐或-80℃中取出凍存細(xì)胞，立即將凍存管放入37℃水浴中并輕輕搖動,，待融化后（約2min即可）立即將解凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含培養(yǎng)液的離心管中,，800-1000rpm下離心5min，棄上清,，加適量培養(yǎng)液輕輕吹打重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,，輕晃使瓶底液體分散均勻，標(biāo)好細(xì)胞名稱,、代數(shù)、復(fù)蘇日期,，顯微鏡下觀察后放入37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中。一般貼壁細(xì)胞過夜即可貼壁,，換液和傳代時(shí)間根據(jù)不同細(xì)胞生長情況而定,。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

復(fù)蘇時(shí)動作要快，盡量減少胞內(nèi)形成冰晶,，影響復(fù)蘇后細(xì)胞活率,。

1. 融化時(shí)盡量不要碰到管口，以免容易造成污染,。

2.若一次性需要復(fù)蘇細(xì)胞很多,，可以分批水浴解凍，防止傳熱不佳使得細(xì)胞融化時(shí)間延長,。

3.若需要同時(shí)復(fù)蘇好幾種細(xì)胞,，提前在離心管和培養(yǎng)瓶上做好標(biāo)記，或記住自己擺放的位置,，不要弄混亂,。