柱層析分離實(shí)驗(yàn)操作步驟

來源：上海嶸崴達(dá)實(shí)業(yè)有限公司 2011年09月27日 13:58

實(shí)驗(yàn)操作步驟如下:

1．確定干燥、不含溶劑的待分離粗產(chǎn)品的重量,。

2．用薄層色譜（TLC）選取溶劑體系,，使Rf的值處于0.2～0.3之間。

3．確定用于樣品上柱的方法,。可有三種選擇：凈試樣法,，溶液法（濕法）或硅膠吸附法（干法）,；對于液體和固體，較為普遍的方法是溶液法（濕法）上樣,，即將樣品溶于溶劑中,，然后將溶液加入分離柱。

4．確定合適的硅膠和化合物的比例,。對于簡單的分離,，通常要求兩者的比例為30~50：1（重量比）；但對比較困難的分離,，需要的比例高達(dá)120：1,。

5．選取合適的分離柱——硅膠量決定了分離柱的尺寸，一般選用短而粗的加壓柱,。

6．選取合適的收集用容器——將硅膠體積除以4,，然后選取能裝下這個體積的容器就可（20L的硅膠對應(yīng)于5 L的組分）。

7．裝柱,。戴好活性炭口罩,，在（落地）通風(fēng)櫥中裝好分離柱，干法和濕法裝柱均可,，只要能把柱子裝實(shí)就行,。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會從一側(cè)斜著下來）,。

8．加樣,。用少量的溶劑溶解待分離粗品,，加樣，加完后將下面的活塞打開,，待溶劑層下降至石英砂面時,，加入淋洗劑，一開始不要加壓,，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm）,，再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行,。

9．樣品的收集,。一邊收集樣品，一邊進(jìn)行色譜分析（TLC,、LC-MS或HPLC）跟蹤柱子的分離進(jìn)程,。

10．將所需純度的流出組分合并后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮。

11．當(dāng)*除去溶劑后,，進(jìn)行分析（LC-MS,、HPLC、或NMR等）,，稱重,。

12．按相關(guān)規(guī)程進(jìn)行清場處理。

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