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一,、是在PCR擴(kuò)增過程中，通過熒光信號,，對PCR進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時檢測,。由于在PCR擴(kuò)增的指數(shù)時期,，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系，所以成為定量的依據(jù),。
二,、將標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后，完成高溫變性,，低溫復(fù)性,，適溫延伸的熱循環(huán)，并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律,，與模板DNA互補(bǔ)配對的Taqman探針被切斷,，熒光素游離于反應(yīng)體系中，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光,，隨著循環(huán)次數(shù)的增加,，被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長，通過實(shí)時檢測與之對應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號強(qiáng)度,，求得Ct值,，同時利用數(shù)個已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對照，即可得出待測標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù),。
三,、分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對,，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,，退火過程中,，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光,。
四,、競爭法：選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增(其中一個引物為熒光標(biāo)記),。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切,，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強(qiáng)度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù),。
相關(guān)產(chǎn)品
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