1,、為什么MACS磁珠分選要使用分選柱？

• 磁珠可以更?。好捞祆淮胖橹睆街挥?0nm,，普通真核細胞直徑一般大于10um,，結合在細胞上的磁珠大小可以忽略不計，因此：1,、攜帶的磁珠不影響細胞大小——可以直接上流式檢測,，不影響FSC數據收集；2,、細胞功能不受影響——分選過程中,，磁珠的結合不會引起細胞的活化及其它生理狀態(tài)的改變，可以保持細胞的原始生理和功能狀態(tài),，尤其在Naive免疫細胞的分選中尤為重要,。

• 抗原表位的占據更少：因為磁場可以被分選柱放大1000-10000倍，所以不需要太多的磁珠結合即可分離不同細胞,。約20%-30%的抗原表位被偶聯了磁珠的抗體結合即可將細胞滯留在磁場中,，這就為后續(xù)實驗預留了足夠的抗原表位，因此，對于表達水平不低的抗原來說,，MACS磁珠分選后的細胞可以直接進行相關熒光抗體標記,，進而進行流式檢測。

• 細胞活力更好：通過分選柱引起的間接磁場放大,，使得細胞在磁場中所承受的直接壓力小,，讓細胞受力均勻；同時,，通過分選柱放大的磁場可以瞬時變大,、離開磁場后磁力又瞬間消失，這些都保證了細胞所受機械力小,，損傷小,，得到的細胞活力高。

• 細胞純度更高：通過去除分選柱,，可以更好的進行去除分選,，提高目的細胞的純度。

2,、是不是所有細胞都要從分選柱上重新獲?。?/span>

不是,。

若使用陽性分選策略,，目的細胞是磁性標記的，在分選器和分選柱產生的磁場中滯留后,，當分選柱移出分選器,，磁場瞬間消失，此時用活塞用力將分選柱中滯留的細胞推出,，從而收集到目的細胞,；

反之，若使用去除分選策略,，此時目的細胞是非磁性標記的,，可直接從洗脫液中獲得。

3,、MACS分選柱有哪幾種,，如何選擇合適的分選柱？

MACS分選柱根據其細胞容量,、用途可以分為幾種：

MS,、LS、LD,、大細胞分選柱,、全血分選柱,、autoMACS分選柱以及用于生物大分子分離的u柱等，選擇分選柱時要根據您的實驗目的,、實驗策略和注重的實驗效果來取舍,，我們在之前的一期微信“如何選擇恰當的分選柱”中有詳細的說明。

4,、MACS分選柱能否重復使用,？

普通的MACS分選柱不建議重復使用，但autoMACS分選柱分可以重復使用,。

重復使用不能保證無菌,，MACS分選柱都是獨立、無菌包裝的,，保證分選下來的細胞無污染,；

分選柱內填充了經親水包被層處理的鐵珠，如果通過浸泡,、洗滌等過程重復使用，那么,，鐵珠表面得親水層被破壞,，裸露的鐵珠與細胞接觸會對流經的細胞產生損失，影響細胞活力和分選效果,。

5,、那為什么autoMACS分選柱可以重復使用呢？

autoMACS分選柱可以在兩周之內使用,，且最多用100次,。

autoMACS分選柱一旦安裝到全自動分選儀上，須保存在液體中,，防止分選柱中的填充基質被氧化無法使用,。

每次使用后應該按照推薦程序進行沖洗和消毒，以便更好的保存和下一次使用,。

6,、全血分選柱與普通分選柱有何不同？

全血分選柱有兩層特殊的基質,，非磁性層和磁性層,；普通細胞分選柱中填充的是均一的親水包被層處理的鐵珠；

全血分選柱柱容量為15ml的全血,；

全血分選柱可用于直接從全血中分選細胞,，無需進行紅細胞裂解或者密度梯度離心的過程，無需先制備PBMC,。