你是否經(jīng)常使用相差顯微鏡來(lái)觀察你的細(xì)胞？那相差顯微鏡是如何工作的,？為什么這種顯微鏡技術(shù)對(duì)科學(xué)家如此重要,？相位對(duì)比如何使幾乎透明的細(xì)胞清晰可見(jiàn)？來(lái)吧,，先睹為快,。

　　什么是相差顯微鏡（Phas Contrast Microscopy）

　　相差顯微鏡是一種特殊的顯微鏡，特別適用于觀察具有很高透明度的對(duì)象,，例如生物切片,、油膜和位相光柵等等,。光波通過(guò)這些物體，往往只改變?nèi)肷涔獠ǖ奈幌喽桓淖內(nèi)肷涔獠ǖ脑龇?，由于人眼及所有能量檢測(cè)器只能辨別光波強(qiáng)度上的差別,，也即振幅上的差別，而不能辨別位相的變化,，因此用普通顯微鏡是難以觀察到這些物體的,。透明度很高的物體，也稱為位相物體,。相襯法（也叫位相反襯法）是通過(guò)空間濾波器將物體的位相信息轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的振幅信息,，從而大大提高透明物體的可分辨性，該方法使科學(xué)家能夠以高水平的細(xì)節(jié)觀察有機(jī)和生物樣品,，而不需要進(jìn)行樣品制備,、染色或標(biāo)記。所以從這個(gè)意義上說(shuō),，相襯法是一種光學(xué)信息處理方法,，而且是最早的信息處理的成果之一，因此在光學(xué)的發(fā)展-史-上具有重要意義,。

　　相差顯微鏡和普通顯微鏡的區(qū)別是：用環(huán)狀光闌代替可變光闌,，用帶相板的物鏡代替普通物鏡，并帶有一個(gè)合軸用的望遠(yuǎn)鏡,。

　　用途：相差顯微鏡主要用于觀察未經(jīng)染色的標(biāo)本和活細(xì)胞,。

　　基本原理：

　　相差顯微鏡利用物體不同結(jié)構(gòu)成分之間的折射率和厚度的差別，把通過(guò)物體不同部分的光程差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹ü鈴?qiáng)度）的差別,，經(jīng)過(guò)帶有環(huán)狀光闌的聚光鏡和帶有相位片的相差物鏡實(shí)現(xiàn)觀測(cè)的顯微鏡,。主要用于觀察活細(xì)胞或不染色的組織切片，有時(shí)也可用于觀察缺少反差的染色樣品,。

　　相差顯微鏡把透過(guò)標(biāo)本的可見(jiàn)光的光程差變成振幅差,，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見(jiàn),。光線透過(guò)標(biāo)本后發(fā)生折射,，偏離了原來(lái)的光路，同時(shí)被延遲了1/4λ（波長(zhǎng)）,，如果再增加或減少1/4λ,，則光程差變?yōu)?/2λ,，兩束光合軸后干涉加強(qiáng),，振幅增大或減下，提高反差,。在構(gòu)造上,，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡4個(gè)特殊之處：

　　1.環(huán)形光闌（annular diaphragm） 位于光源與聚光器之間,，作用是使透過(guò)聚光器的光線形成空心光錐，焦聚到標(biāo)本上,。

　　2.相位板（annular phaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種：

　?。?）A+相板：將直射光推遲1/4λ,，兩組光波合軸后光波相加，振幅加大,，標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變亮,，形成亮反差（或稱負(fù)反差）。

　?。?）B+相板：將衍射光推遲1/4λ,，兩組光線合軸后光波相減，振幅變小,，形成暗反差（或稱正反差）,，結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗。

　　3.合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡 (centring telescope)：用于調(diào)節(jié)環(huán)狀光闌的像與相板共軛面-完-全吻合,?！　?/span>

　　相差顯微鏡有哪些優(yōu)點(diǎn)？

　　相位對(duì)比顯微鏡的一個(gè)重要優(yōu)勢(shì)是可以自然地研究任何活細(xì)胞,，而不需要固定,、標(biāo)記或染色。

　　該技術(shù)產(chǎn)生的所有圖像可以是無(wú)標(biāo)簽的,。這也為研究人員節(jié)省了時(shí)間,，并減少了實(shí)驗(yàn)之間出現(xiàn)錯(cuò)誤或變化的機(jī)會(huì)。

　　相位對(duì)比法對(duì)透明樣品效果很好,，因?yàn)轭~外的干擾使樣品更加明顯,。在這種技術(shù)中，整個(gè)物體都被照亮了,。

　　對(duì)于研究活細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)成分,，相襯顯微鏡提供了相對(duì)較高的分辨率。細(xì)胞線粒體,、有絲分裂的染色體,、空泡和其他活細(xì)胞成分都可以用這種方法來(lái)研究。

　　相差顯微鏡的組件也可以添加到幾乎所有類型的光學(xué)顯微鏡中,，只要相位物鏡符合顯微鏡的管長(zhǎng)參數(shù),，聚光器可以與正確尺寸的環(huán)形相位環(huán)聯(lián)姻。這使得它成為一種靈活和廣泛適用的技術(shù)。