1.熒光原位雜交概念

熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一種非放射性原位雜交技術,，同時也是一種新型的分子生物學與細胞遺傳學相結合的技術,。熒光原位雜交技術是利用熒光檢測系統(tǒng)對DNA進行定性,、定量或相對定位分析的技術,，其基本原理是根據DNA序列的互補性,，用已知的熒光素,、生物素標記的核酸探針與待檢測樣本的DNA進行雜交,，形成可檢測的雙鏈核酸雜交,。

2.熒光原位雜交探針標記方法

熒光原位雜交探針的熒光標記有兩種方法,。間接標記法是用生物素標記DNA探針，直接標記法是將熒光素與探針核苷酸或磷酸戊糖骨架直接結合,。直接標記法檢測步驟簡單,，但靈敏度不如間接標記法，因為信號不能放大,。

3.熒光原位雜交探針類型

（1）雙鏈DNA探針,， 目前應用廣泛，簡便易行,，不易降解,，一旦克隆成功，就可運用相同的擴增和標記程序獲得大量的標記探針

（2）單鏈DNA（ssDNA）探針,，穩(wěn)定,，更易于使用,，更具特異性對RNase具有抗性，更好的組織滲透性,，無自我雜交

（3）RNA探針（核糖體探針）,，更高的熱穩(wěn)定性，更好的組織穿透力,，特異性更高,，RNase的影響更小

（4）合成寡核苷酸，經濟,、穩(wěn)定,、特異性強，對RNase具有抗性,，組織滲透性好,，重現性好

4.熒光原位雜交技術優(yōu)勢

熒光原位雜交法具有其他雜交方法沒有的優(yōu)勢：

（1）FISH是非放射性元素標記，更加安全,；

（2）FISH的實驗周期短,，可同時檢測多種序列；

（3）FISH技術因其多次免疫化學反應增強了雜交信號,，靈敏度與放射性探針相當 ,。

5.熒光原位雜交應用

熒光原位雜交技術廣泛應用于基因表達分析、染色體結構和數目異常檢測,、癌癥的快速臨床診斷,、人類產前診斷等領域，有著非常重要的應用價值,。

6.卡梅德生物能夠為客戶提供高質量的熒光原位雜交服務

卡梅德生物（KMD Bioscience）致力于細胞生物學研究多年,，擁有經驗豐富的熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技術服務人才,，搭建了完備的FISH技術服務平臺,，我們能夠提供包括從探針設計、樣本處理,、雜交檢測,、基因表達研究到數據分析等一站式FISH技術服務，擁有規(guī)范和標準的檢測程序,，從而保證實驗結果的準確性,，降低了假陽性和假陰性。卡梅德生物同時可定制合成多種類探針,，包括大部分植物,、動物、微生物,，定制的探針大于150kb,，特異性強,，出錯率低；利用熒光原位雜交技術,，卡梅德生物還可以提供單克隆源性鑒定服務。

7.熒光原位雜服務交流程介紹

卡梅德生物可以提供熒光原位雜交服務,，主要技術流程如下：探針設計與合成,，樣本處理，原位雜交實驗,，成像拍照,，結果分析與項目報告。

7.1探針設計和合成

7.1.1即用型探針可以直接雜交,，非即用型探針需要與與雜交液按 1：1：1：50 比例稀釋,，85℃變性 3 分鐘，37℃平衡 5 分鐘,。

7.2樣本處理

7.2.1脫蠟復水,，將石蠟切片浸入二甲苯中脫蠟，2 次,，每次 10 分鐘,；

7.2.2片子依次過乙醇、85%,、75%乙醇,，各 3 分鐘，PBS 3 分鐘,；

7.2.3 片子加胃蛋白酶消化液,，37℃消化 15-30 分鐘，PBS 洗滌 2 次,，每次 3 分鐘,；

7.2.4預雜交：提前 30 分鐘從冰箱中取出雜交液恢復至室溫，滴加雜交液,，雜交 儀中 55℃孵育 1 小時,。

7.3原位雜交實驗

7.3.1取出預雜交好的片子，去除多余液體,，將探針滴加于片子上,，覆蓋組織， 放于雜交儀中 37℃雜交過夜,；  

7.3.2片子入 2×SSC（0.1％NP-40）中洗滌 3 次,，每次 5 min；

7.3.3 滴加 20ul DAPI-Antifade Solution 蓋玻片封片,，避光孵育 20min,。

7.4成像拍照

卡梅德生物不同樣本熒光原位雜交實驗結果拍照：

7.5結果分析與項目報告

卡梅德生物交付：剩余的探針,、切片以及樣品，原始雜交顯色成像照片,，詳細的實驗報告（包含完整的實驗流程及結果分析）,。

卡梅德生物的技術專家將提供專業(yè)的一對一的定制化方案以及不同種屬樣本的檢測，從探針設計,、染色體/細胞/細菌制備/培養(yǎng)到結果呈現的全套定制熒光原位雜交（FISH）服務,，交付完整的實驗報告和拍照圖片。