各種類型ELISA測定時一般需經(jīng)過以下步驟:固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結果,。ELISA操作較繁雜,操作不當將引起較大的誤差,。在操作中應注意以下5個方面,。
1.隨著病情的進展或由其他因素影響,某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)生大幅波動,,因此有必要對標本進行預處理,,例如對血清標本作適當稀釋,或離心分離血脂等,。間接法測定中,,標本適當稀釋還可降低非特異性反應。
2.加樣一般使用加液器,,在ELISA中一般有4次加樣:加標本,、加酶結合物、加底物和加終止液,。加標本時必須每份標本使用一支移液器吸嘴,,以免交叉污染。加酶結合物,、底物和終止液時則不需更換吸嘴,。
3.在成批手工檢測中,還應注意操作時差的影響,。加樣及混勻時間的差異,,使抗原抗體反應和酶促反應時間不一致,對競爭法及定量檢測影響很大,,不注意可能會導致錯誤結果或定量不準,。
4.洗滌是ELISA操作過程中決定實驗成敗的一個關鍵步驟。目的是除去未結合的免疫反應物,終止抗原抗體反應,,除去標本中與反應無關的成分,、游離的酶標物以及反應過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)??捎孟窗鍣C洗板或手工洗板,,前者洗滌質(zhì)量較好,各反應孔洗滌效果均一,,批內(nèi),、批間差異小,手工洗板應注意控制各孔洗滌效果,,差異不宜太大,。
5.準確判定結果須使用ELISA測讀儀(酶標儀),比色法判讀可選擇單波長或雙波長,,根據(jù)反應液顏色的不同選用不同波長的濾光片,,以空白孔校零測定反應孔的吸光度值(A值)。酶標儀具有良好的重復性,。
相關產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉載,、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的,應在授權范圍內(nèi)使用,,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”,。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關法律責任,。
- 本網(wǎng)轉載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任,。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時,,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容,、版權等問題,,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關權利,。