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各種類型ELISA測定時一般需經(jīng)過以下步驟：固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結果,。ELISA操作較繁雜，操作不當將引起較大的誤差,。在操作中應注意以下5個方面,。
1．隨著病情的進展或由其他因素影響，某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)生大幅波動,，因此有必要對標本進行預處理,，例如對血清標本作適當稀釋，或離心分離血脂等,。間接法測定中,，標本適當稀釋還可降低非特異性反應。
2．加樣一般使用加液器,，在ELISA中一般有4次加樣：加標本,、加酶結合物、加底物和加終止液,。加標本時必須每份標本使用一支移液器吸嘴,，以免交叉污染。加酶結合物,、底物和終止液時則不需更換吸嘴,。
3．在成批手工檢測中，還應注意操作時差的影響,。加樣及混勻時間的差異,，使抗原抗體反應和酶促反應時間不一致，對競爭法及定量檢測影響很大,，不注意可能會導致錯誤結果或定量不準,。
4．洗滌是ELISA操作過程中決定實驗成敗的一個關鍵步驟。目的是除去未結合的免疫反應物，終止抗原抗體反應,，除去標本中與反應無關的成分,、游離的酶標物以及反應過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)?？捎孟窗鍣C洗板或手工洗板,，前者洗滌質(zhì)量較好，各反應孔洗滌效果均一,，批內(nèi),、批間差異小，手工洗板應注意控制各孔洗滌效果,，差異不宜太大,。
5．準確判定結果須使用ELISA測讀儀（酶標儀），比色法判讀可選擇單波長或雙波長,，根據(jù)反應液顏色的不同選用不同波長的濾光片,，以空白孔校零測定反應孔的吸光度值（A值）。酶標儀具有良好的重復性,。
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