鬼筆環(huán)肽（phalloidin 鬼筆鵝膏素）
 

　　從一種毒性菇類中分離的劇毒生物堿,，C35H48N8O11S,。無色,，細(xì)針狀結(jié)晶，系從毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中得到的有毒的環(huán)狀七肽,。與鵝膏蕈堿（amanitin）一起存在,，毒性比鵝膏蕈堿弱,，對小鼠的致死劑量是50微克,，對人體也有很強(qiáng)的毒性,，可引起流涎、嘔吐,、便血,、發(fā)紺、痙攣,、肌肉攣縮,，以致死亡。它同細(xì)胞松弛素Ｂ的作用相反, 只與聚合的微絲結(jié)合, 而不與肌動蛋白單體分子結(jié)合,。它同聚合的微絲結(jié)合后, 抑制了微絲的解體, 因而破壞了微絲的聚合和解聚的動態(tài)平衡,。鬼筆環(huán)肽可以與聚合的微絲結(jié)合的特殊性質(zhì)使得它具有一個頗富前景的用途：通過讓這種毒素吸附于熒光染料上面，研究人員可以研究細(xì)胞的內(nèi)部工作機(jī)制,，窺視細(xì)胞如何分裂。通過這些觀察,，他們可以揭開癌癥工作機(jī)制和組織生長之謎,。
 

　　美國加州大學(xué)圣克魯斯分校的兩位化學(xué)家斯科特·洛基和勞拉·舒利斯科（Laura Schuresko）利用一種稱為固體階段合成（solid-phase synthesis）的手法，制造出這種致命物質(zhì),。他們不是將幾種化學(xué)物質(zhì)放入燒瓶混合,，讓它們自由飄浮，而是在化學(xué)反應(yīng)期間對其中一種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行適當(dāng)約束,，這樣一來,，研究人員在復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)過程中可以更好地對其進(jìn)行控制。
 

　　FITC和Rhodamin等熒光物質(zhì)標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽可特異的與真核細(xì)胞的F-acting結(jié)合,，從而顯示微絲骨架在細(xì)胞中的分布,。鬼筆環(huán)肽的配制：0.1mg鬼筆環(huán)肽溶于1ml無水甲醇（也可用DMSO或無水乙醇溶解）配成貯存液，可在-20度避光的條件下長期保存,，工作液的濃度為5ug/ml,，由貯存液加生理鹽水PBS稀釋20倍即可。
 

　　染色程序：
 

　　生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次,，每次10分鐘,；
 

　　3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分鐘，生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次；
 

　　加入5ug/ml的FITC-鬼筆環(huán)肽室溫染色30-60分鐘,，夏季時間可以短一些,，生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次；
 

　　DAPI或hoechst33258染細(xì)胞核10分鐘,，生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次,；
 

　　吸去多余水分，加熒光封片液（中性或偏堿性緩沖液加等量甘油）,，蓋上蓋玻片,，熒光或共聚焦顯微鏡下觀察。
 

　　注意事項：
 

　　鬼筆環(huán)肽的分子量小,，很容易通過細(xì)胞,，不需要對細(xì)胞進(jìn)行冷丙酮和TRITON X-100處理。
 

　　藥品價格昂貴,，0.1mg的售價接近兩千元,，要節(jié)約使用。
 

　　毒性較大,，戴上手套操作,。