口蹄疫A型抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名：口蹄疫A型抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A（ELISA）

【包裝規(guī)格】×2/盒96T×1/盒、96T、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus,，FMDV）引起的偶蹄動物的一種急性,、熱性,、高度接觸性傳染病,，其特征為口腔黏膜,、蹄部,、乳房皮膚發(fā)生水泡和爛斑,。

本試劑用于檢測牛、羊,、豬血清中口蹄疫A型抗體,，可用于口蹄疫A型疫苗免疫效果評價。

【原    理】

    本試劑盒由預(yù)包被口蹄疫A型抗體的酶標板,、抗體工作液,、抗原液、酶標記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用阻斷酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測牛,、羊、豬血清樣本中口蹄疫A型抗體,。實驗時將稀釋的樣本與抗原液同時加入酶標板中孵育,，樣本中的抗體與酶標板上的抗體競爭抗原，阻斷抗原與板的結(jié)合,；經(jīng)洗滌后,，再加抗體工作液孵育；經(jīng)洗滌后加入酶標記物孵育,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標記物,，在孔中加底物液，與酶標結(jié)合物反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有口蹄疫A型抗體,。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月,。

包被板開封后請于2～8℃避光保存,，避免受潮。使用期限為2個月,。

【適用儀器】 含450nm,、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設(shè)備,，可調(diào)微量移液器,。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無溶血,、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，長期需置-20℃保存,。

2.用工作洗滌液將待檢牛、羊先按32倍稀釋（如5μl血清加入155μl工作洗滌液中,，混勻）,，待檢豬血清按16倍稀釋（如5μl血清加入75μl洗滌液中，混勻）,，陰、陽性對照不用稀釋,。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫,。

2.取所需用量酶標板條，設(shè)陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存。

3.陰,、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照50μl，樣品孔每孔先加入工作洗滌液25ul,，再加入稀釋后的樣品25μl,；最后都加入抗原液50μl,。

  注：加入抗原后牛、羊樣本稀釋比例相當于1:128,，豬樣本稀釋比例相當于1:64,。

4.震蕩混勻10秒，蓋好蓋板膜,，置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體,，每孔加350μl工作洗滌液,，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次,，最后一次拍干,。

6.每孔加抗體工作液50μl，蓋好蓋板膜,，置37℃避光反應(yīng)30分鐘,。

7.洗滌，同步驟5,。

8.每孔加酶標記物50μl,，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘,。

9.洗滌,，同步驟5。

10.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,，混勻，蓋好蓋板膜,，置37℃避光反應(yīng)15分鐘,。

11.每孔加終止液50μl，混勻,，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）,。

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照A值≥1.0,，陽性對照A值≤陰性對照A值×50%,。

【檢驗結(jié)果的解釋】

1.PI（阻斷率）=（1- 陰性對照平均A值(樣本A值)）×100%，PI≥50%為陽性,；PI＜50%為陰性,。

2.本實驗檢測牛、羊血清結(jié)果為陽性時表明待檢樣本中含有口蹄疫A型抗體，且效價高于1:128,，達到保護水平,；反之檢測結(jié)果為陰性時表明待檢樣本中不含有口蹄疫A型抗體，或效價低于1:128,，未達到充足保護水平,。

3.本實驗檢測豬血清結(jié)果為陽性時表明待檢樣本中含有口蹄疫A型抗體，且效價高于1:64,，達到保護水平,；反之檢測結(jié)果為陰性時表明待檢樣本中不含有口蹄疫A型抗體，或效價低于1:64,，未達到充足保護水平,。

4.如需了解樣本抗體的最終效價，可將樣本進行梯度稀釋,，使PI≥50%的最高稀釋比例即為該樣本抗體的最終效價,。

【試驗方法的局限性】

該試驗僅作為定性牛、羊,、豬血清中口蹄疫A型抗體,，根據(jù)PI值高低可作抗體水平強、中,、弱的粗略評估,。

該試劑盒不適用于合成肽疫苗免疫抗體效價評估