(1)定義薄層色譜,,或稱薄層層析,,薄層層析是把支持物均勻涂布于支持板(常用玻璃板,也可用滌綸布等)上形成薄層,,然后用相應(yīng)的溶劑進行展開,。從而對混合樣品進行分離、鑒定和定量的一種層析分離技術(shù),。
(2)分類薄層層析可根據(jù)作為固定相的的支持物不同,,分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素),、薄層離子交換層析(離子交換劑),、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等,。一般實驗中應(yīng)用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。
(3)方法的優(yōu)缺點
①優(yōu)點:操作方便,、設(shè)備簡單,、顯色容易等特點,同時展開速率快,,一般僅需15~20min,;混合物易分離,分辨力一般比以往的紙層析高10~100倍,,它既適用于只有
0.01μg的樣品分離,,又能分離大于500mg的樣品作制備用,而且還可以使用如濃硫酸,、濃鹽酸之類的腐蝕性顯色劑,。
②缺點:對生物高分子的分離效果不甚理想。
(3)操作步驟
①薄層板制備:除另有規(guī)定外,,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,,去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,,在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布(厚度為
0.2~O.3mm),,取下涂好薄層的玻板,置水平臺上于室溫下晾干,,后在110℃烘30min,,即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視),。
②點樣:除另有規(guī)定外,,用點樣器點樣于薄層板上,一般為圓點,,點樣基線距底邊2.Ocm,,樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜,。點樣時必須注意勿損傷薄層表面,。
③展開:展開室如需預(yù)先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,,并在壁上貼二條與室一樣高,、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,,密封室頂?shù)纳w,,使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.Ocm(切勿將樣點浸入展開劑中),,密封室蓋,,待展開至規(guī)定距離(一般為10-15cm),取出薄層板,,晾干,,按各品種項下的規(guī)定檢測。
④顯色:取出的薄層板,,立即噴灑顯色劑,,使其顯色,計算Rf值或使之出現(xiàn)各種有色的斑點,,與標(biāo)準(zhǔn)進行對照比較,,可確定其成分。
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