浸泡并過夜,，第二天先用自來水沖洗20遍,，再置于無水酒清中浸泡6小時，再用三蒸水沖洗3遍（個人認為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了,，如果不干凈的話,，細胞帖壁不好），放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進行高壓消毒。高壓后取出放入烤箱中烤干,，備用,。烤干后可放入超凈臺中,。

4.多聚賴氨酸的使用：

很多人都將玻片用此處理,，以使細胞與玻片結合更牢。但我在做爬片時從來沒用過多聚賴氨酸,，細胞貼壁仍然很好,，且在做后續(xù)的免疫細胞化學染色、TUNEL等凋亡檢測,、免疫熒光等也從未脫過片,。

細胞爬片的操作

1.胰酶消化細胞后計數重懸細胞于培養(yǎng)基中。

2.加細胞前,，根據玻片的大小,，先在每個孔里準備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基，使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,，然后放玻片,，防止加細胞懸液時玻片漂起，造成雙層細胞貼片,。(整個過程注意無菌操作)

3.根據自己的需要選擇合適的細胞密度接入培養(yǎng)板內即可,。

4.待細胞貼壁后，可去上清加含藥培養(yǎng)基,。

5.按照實驗設計,，作用一定時間后取玻片,。取玻片時由于玻片與培養(yǎng)皿底結合較緊,，張力較大，一般將注射器針頭針尖向背面弄個小鉤,，這樣將爬片輕輕勾起,，用小鑷子取出就可以了。如果要做諸如24h,，48h,，72h等這樣時間點的實驗的話，將所需數量的爬片取出時應用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子,。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng),。

細胞爬片的固定

另外在保存細胞爬片的時候，一般用培養(yǎng)皿或板,，先在皿底放一層面巾紙,，然后再放爬片，這樣方便做實驗時取片。

細胞爬片取出后,，一般用PBS洗2遍,，然后再做固定。當然,，有例外,，比如做凋亡的TUNEL染色時就避免洗，因為凋亡的細胞在洗的過程中有可能會脫落,。

然后蓋上蓋子,，并在蓋子上做標記，為避免混淆,，可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起,。一般-20℃保存2-3個月的片子做免疫組化是沒有問題的。