霍亂弧菌O139(VC O139)核酸檢測試劑盒適用于ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler,、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
1,、試劑配制（試劑準備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應(yīng)管數(shù)每滿10份,，多配制 1份）,，每測試反應(yīng)體系配制如下表：將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21μL/管。

2,、加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟1提取的核酸,、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋，混勻,， 短暫離心,。
3、 PCR擴增（核酸擴增區(qū)）
3.1  將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi),；
3.2  設(shè)置好通道,、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL,；
熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光,，選擇None即可,。
3.3  推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

4、結(jié)果分析判定
4.1  結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置Baseline和Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的start值（一般可在3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié)）、stop值（一般可在5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié)）,，以及Threshold的Value值（上下拖動閾值線至高于陰性對照）,，重新分析結(jié)果。
4.2  結(jié)果判斷
陽性：檢測通道Ct 值≤35,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,；
可疑：檢測通道35值≤38，建議重復(fù)檢測,，如果檢測通道仍為35值≤38,，且曲線有明顯的增長曲線， 判定為陽性,，否則為陰性,；陰性：樣本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。
5,、質(zhì)控標準
陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無Ct值顯示,；
陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且Ct值≤32,； 以上條件應(yīng)同時滿足,，否則實驗視為無效。