霍亂弧菌O139(VC O139)核酸檢測(cè)試劑盒適用于ABI ,、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀,。
1、試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照,；反應(yīng)管數(shù)每滿10份，多配制 1份）,，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,，21μL/管。

2,、加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟1提取的核酸,、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心,。
3,、 PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
3.1  將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；
3.2  設(shè)置好通道,、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL；
熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE,，ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可,。
3.3  推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

4,、結(jié)果分析判定
4.1  結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置Baseline和Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的start值（一般可在3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié)）,、stop值（一般可在5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié)），以及Threshold的Value值（上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照）,，重新分析結(jié)果,。
4.2  結(jié)果判斷
陽(yáng)性：檢測(cè)通道Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線,；
可疑：檢測(cè)通道35值≤38,，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為35值≤38,，且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線,， 判定為陽(yáng)性，否則為陰性,；陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無(wú)Ct值,。
5、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無(wú)Ct值顯示,；
陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且Ct值≤32,； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。