免疫組化問題解答

來源：優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司 2023年04月03日 19:24

一.染色過強(qiáng) 原因解決方法

1.抗體濃度過高或孵育時(shí)間過長降低抗體滴度、抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4度過夜

2.孵育溫度過高超過37度一般在室溫20-28度 c DAB顯色時(shí)間過長或濃度過高顯色時(shí)間不超過5-12分鐘,，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn),。

二.非特異性背景染色原因解決方法

1.操作過程中沖洗不充分每步?jīng)_洗3次每次5分鐘

2.組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時(shí)間延長

3.組織中含內(nèi)原性生物素正常非免疫動(dòng)物血清再封閉

4.血清蛋白封閉不充分延長血清蛋白封閉時(shí)間。

三.染色弱原因解決方法

1.抗體濃度過低,、孵育時(shí)間過短提高抗體濃度,、孵育時(shí)間不能少于60分鐘

2.試劑超過有效使用時(shí)間應(yīng)更換試劑

3.操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液使試劑稀釋（應(yīng)防止切片干燥） 4.室溫太低低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過夜 e 蛋白封閉過度封閉不要超過12分鐘。

四.染色陰性原因解決方法

1.操作步驟錯(cuò)誤應(yīng)重試設(shè)陽性對(duì)照

2.組織中無抗原設(shè)陽性對(duì)照以驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3.一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤仔細(xì)確定一抗二抗種屬無誤

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