AAV/LVV為載體的眼用注射液的不溶性微粒檢查

腺病毒相關病毒（adeno-associated virus，AAV）是一類單鏈線狀DNA缺陷型病毒,，有多種血清型，且不同血清型的AAV具有不同的組織器官靶向性,。通過修飾,、突變AAV的外殼蛋白序列產生新的組織傾向性的血清型。安全性高,、可長期表達,，治療效果持久，且易于純化,，被視為最有前途的基因轉移載體之一,，在世界范圍內的基因治療和疫苗研究中得到廣泛應用。全球已有多個基因治療產品上市,。

慢病毒載體（Lentivirus, LV）是細胞和基因療法常用的遞送載體之一,，它的主要功能是將目的基因轉移并整合到宿主細胞的基因組中，可以用來研究基因水平上的生物學調控機制,。作為一種宿主范圍很廣的病毒載體,，它們能夠轉導分裂和非分裂細胞，例如神經(jīng)元,、造血干細胞和免疫細胞,，尤其是T細胞。近年來,，慢病毒轉導技術已經(jīng)成功應用于CAR-T細胞的制備,。

隨著AAV和LVV相關載藥技術的不斷進步，其相關制劑的不溶性微粒檢查也受到越來越多的關注,，特別是基于AAV和LVV載藥技術的眼用注射液,。眼用注射液作為眼用制劑的重要方面，其不溶性微粒檢查主要是參照USP789 眼用溶液的標準,。

USP789關于不溶性微粒的檢查規(guī)定了兩種方法,，第一種是光阻法，第二種是顯微計數(shù)法,，但是兩種方法的判定標準是一致的,，具體詳見下圖：

本文將通過一款特殊的LVV眼用注射液對比兩種方法的一個差別：

樣品信息如下：

光阻法-不溶性微粒測試結果如下圖所示：

由上圖可以看出，大于等于10μm以上的微粒為929.67個/ml,，大于等于25μm以上的微粒為40.67個/ml,，大于等于50μm以上的微粒為0個/ml，根據(jù)USP789光阻法判定標準,，判定樣品不符合檢查的規(guī)定,。

顯微計數(shù)法-不溶性微粒測試結果如下圖所示：

由上圖可以看出，大于等于10μm以上的微粒為9個/ml,，大于等于25μm以上的微粒為3個/ml,，大于等于50μm以上的微粒為2個/ml,，根據(jù)USP789顯微計數(shù)法判定標準，判定樣品符合檢查的規(guī)定,。

結論：

兩種不同的方法,，測試結果確實有非常大的差別，主要原因是：

1 一般眼用注射液相關制劑裝量都比較少,，要滿足光阻法的檢查一般需要混合多支進行檢查,，或者進行稀釋進行檢查，無論哪種方法,，在制樣的過程中容易產生氣泡,，加上體系本身少量的硅油會被當成微粒，造成很多假性的結果,，因此導致樣品測試結果不合格,；

2 顯微計數(shù)法跟光阻法相比，是整支全部進行檢查,，不需要考慮裝量的影響,，制備樣品的過程中，同時可以去除氣泡和硅油等的影響,，反映體系真實的不溶性微粒結果,；同時可以通過觀察不溶性微粒的形貌去溯源不溶性微粒的來源，改善產品工藝,，提高產品質量,。

下圖為LVV眼用制劑中的一些特征不溶性微粒圖片：

檢查儀器如下圖所示：

胤煌科技(YinHuang Technology)是一家專注于為醫(yī)藥、半導體及化工材料等行業(yè)提供檢測分析設備及技術服務的高科技公司,，致力于為客戶提供全面,、準確的檢測分析和解決方案。主營產品包括不溶性微粒分析儀,，可見異物檢查分析儀,，原液粒度及Zeta電位分析儀，CHDF高精度納米粒度儀,，高分辨納米粒度儀,，溶液顏色測定儀，澄清度測定儀等,，公司自主研發(fā)的YH-MIP系列顯微計數(shù)法不溶性微粒儀,、YH-FIPS系列流式動態(tài)圖像法粒度儀，YH-FIPS系列微流成像顆粒分析儀已經(jīng)在生物醫(yī)藥,、半導體及材料化工領域得到廣泛應用,。