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一文讀懂藥物分析中液相色譜6大檢測器

來源:武漢集思儀器設備有限公司   2023年03月27日 15:58  

檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號,常用檢測器有紫外吸收,、熒光,、示差折光、化學發(fā)光等。

檢測器分類

A.選擇性檢測器:組分性質(zhì)

1,、紫外可見吸收檢測器(UVD)

2,、熒光檢測器(FD)

B.通用型檢測器:總體性質(zhì)

3、蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)

4,、電化學檢測器(ED)

5,、示差折光檢測器(RID)

一、紫外可見吸收檢測器

紫外可見吸收檢測器(ultravioletvisible detector,,UVD) 是HPLC中應用幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測器,。

其特點是靈敏度較高,線性范圍寬,,噪聲低,,適用于梯度洗脫,對強吸收物質(zhì)檢測限可達1ng,,檢測后不破壞樣品,,可用于制備,并能與任何檢測器串聯(lián)使用,。紫外可見檢測器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計相似,,實際上就是裝有流動地的紫外可見光度計。

 

 

1)紫外吸收檢測器

紫外吸收檢測器常用氘燈作光源,,氘燈則發(fā)射出紫外-可見區(qū)范圍的連續(xù)波長,,并安裝一個光柵型單色器,其波長選擇范圍寬(190nm800nm),。

它有兩個流通池,,一個作參比,一個作測量用,,光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上,,若兩流通池都通過純的均勻溶劑,則它們在紫外波長下幾乎無吸收,,光電管上接受到的輻射強度相等,,無信號輸出。

當組分進入測量池時,,吸收一定的紫外光,,使兩光電管接受到的輻射強度不等,這時有信號輸出,,輸出信號大小與組分濃度有關,。

局限:流動相的選擇受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶劑不能做流動相,,每種溶劑都有截止波長,,當小于該截止波長的紫外光通過溶劑時,溶劑的透光率降至10%以下,因此,,紫外吸收檢測器的工作波長不能小于溶劑的截止波長,。

2)光電二極管陣列檢測器(photodiode array detector, PDAD

也稱快速掃描紫外可見分光檢測器,,是一種新型的光吸收式檢測器,。它采用光電二極管陣列作為檢測元件,構(gòu)成多通道并行工作,,同時檢測由光柵分光,,再入射到陣列式接收器上的全部波長的光信號,然后對二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù),,得到吸收值(A)是保留時間(tR)和波長(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖,。由此可及時觀察與每一組分的色譜圖相應的光譜數(shù)據(jù),從而迅速決定靈敏度的波長,。

單光束二極管陣列檢測器,,光源發(fā)出的光先通過檢測池,透射光由全息光柵色散成多色光,,射到陣列元件上,,使所有波長的光在接收器上同時被檢測。陣列式接收器上的光信號用電子學的方法快速掃描提取出來,,每幅圖象僅需要10ms,,遠遠超過色譜流出峰的速度,因此可隨峰掃描,。

 二,、熒光檢測器

熒光檢測器(fluorescence detector, FD) 是一種高靈敏度,、有選擇性的檢測器,,可檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學衍生化生成熒光衍生物,,再進行熒光檢測。

其最小檢測濃度可達0.1ngml,,適用于痕量分析,;一般情況下熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個數(shù)量級,但其線性范圍不如紫外檢測器寬,。

近年來,,采用激光作為熒光檢測器的光源而產(chǎn)生的激光誘導熒光檢測器極大地增強了熒光檢測的信噪比,因而具有很高的靈敏度,,在痕量和超痕量分析中得到廣泛應用,。

 

 

三、示差折光檢測器

示差折光檢測器(differential refractive Index detector, RID)是一種濃度型通用檢測器,,對所有溶質(zhì)都有響應,,某些不能用選擇性檢測器檢測的組分,如高分子化合物,、糖類,、脂肪烷烴等,可用示差檢測器檢測,。示差檢測器是基于連續(xù)測定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測定樣品含量的,。

光從一種介質(zhì)進入另一種介質(zhì)時,由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會產(chǎn)生折射,。只要樣品組分與流動相的折光指數(shù)不同,,就可被檢測,二者相差愈大,,靈敏度愈高,,在一定濃度范圍內(nèi)檢測器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。

四,、電化學檢測器

電化學檢測器(electrochemical detector,, ED) 主要有安培、極譜,、庫侖,、電位、電導等檢測器,,屬選擇性檢測器,,可檢測具有電活性的化合物。目前它已在各種無機和有機陰陽離子,、生物組織和體液的代謝物,、食品添加劑、環(huán)境污染物,、生化制品,、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測定中獲得了廣泛的應用。其中,,電導檢測器在離子色譜中應用最多,。

電化學檢測器的優(yōu)點是:

①靈敏度高,最小檢測量~般為ng級,,有目可達pg級,;

②選擇性好,可測定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì),;

③線性范圍寬,,一般為45個數(shù)量級,;

④設備簡單,成本較低,;

⑤易于自動操作,。

五、化學發(fā)光檢測器

化學發(fā)光檢測器(Chemiluminescence detector,, CD) 是近年來發(fā)展起來的一種快速,、靈敏的新型檢測器,因其設備簡單,、價廉,、線性范圍寬等優(yōu)點。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進行化學反應,,生成處于激發(fā)態(tài)勢反應中間體或反應產(chǎn)物,,當它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時,就發(fā)射出光子,。

由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學反應,,故叫作化學發(fā)光。當分離組分從色譜柱中洗脫出來后,,立即與適當?shù)幕瘜W發(fā)光試劑混合,,引起化學反應,導致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射,,其光強度與該物質(zhì)的濃度成正比,。

這種檢測器不需要光源,也不需要復雜的光學系統(tǒng),,只要有恒流泵,,將化學發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中,使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學發(fā)光,,通過光電倍增管將光信號變成電信號,,就可進行檢測。這種檢測器的最小檢出量可達10-12g,。

六,、蒸發(fā)光散射檢測器

蒸發(fā)光散射檢測器(EvaporativeLight-scatteringDetector , ELSD),能檢測不含發(fā)色團的化合物,,如:碳水化合物,、脂類、聚合物,、未衍生脂肪酸和氨基酸,、表面活性劑,、藥物(人參皂苷,、黃芪甲苷),,并在沒有標準品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)未知的情況下檢測未知化合物 。

蒸發(fā)光散射檢測器的檢測原理為,,首先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠,,然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā),最后余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測池中得到檢測,。

1,、霧化:

液體流動相在載氣壓力的作用下在霧化室內(nèi)轉(zhuǎn)變成細小的液滴,從而使溶劑更易于蒸發(fā),。液滴的大小和均勻性是保證檢測器的靈敏度和重復性的重要因素,。蒸發(fā)光散射檢測器,通過對氣壓和溫度的精確控制,,確保在霧化室內(nèi)形成一個較窄的液滴尺寸分布,,使液滴蒸發(fā)所需要的溫度大大降低。

2,、蒸發(fā):

載氣把液滴從霧化室運送到漂移管進行蒸發(fā),。在漂移管中,溶劑被除去,,留下微?;蚣?nèi)苜|(zhì)的小滴。蒸發(fā)光散射檢測器采用低溫蒸發(fā)模式,,維持了顆粒的均勻性,,對半揮發(fā)性物質(zhì)和熱敏性化合物同樣具有較好的靈敏度。

3,、檢測:

光源采用激光,,溶質(zhì)顆粒從漂移管出來后進入光檢測池,并穿過激光光束,。被溶質(zhì)顆粒散射的光通過光電倍增管進行收集,。溶質(zhì)顆粒在進入光檢測池時被輔助載氣所包封,避免溶質(zhì)在檢測池內(nèi)的分散和沉淀在壁上,,極大增強了檢測靈敏度并極大地降低了檢測池表面的污染,。

不同于紫外和熒光檢測器,ELSD的響應不依賴與樣品的光學特性,,任何揮發(fā)性低于流動相的樣品均能被檢測,,不受其官能團的影響。敏度比示差折光檢測器高,,對溫度變化不敏感,,基線穩(wěn)定,適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用,。


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