菌種保藏是指保持微生物菌株的活力和遺傳性狀的技術,。微生物在使用和傳代過程中容易發(fā)生污染,、變異甚至死亡,，因而常常造成菌種的衰退,。菌種保藏的目的就是使菌株存活,、不丟失、不污染雜菌、不發(fā)生或少發(fā)生變異,，保持菌種原有的活性和各種特征。菌種保藏的基本原理是使微生物的生命活動處于半永jiu性的休眠狀態(tài),，也就是將微生物的新陳代謝作用限制在最di范圍內,。

實驗室常用的保菌方法有：甘油保菌法、斜面保菌法,、穿刺保菌法,、液體石蠟覆蓋保藏法、沙土保藏法,、冷凍干燥法,。微基生物在以上幾種菌種保藏方法的基礎上，開發(fā)出了保菌效果更好瓷珠保菌法,。

一,、甘油保菌法

此方法適用于菌種的中長期保藏，保藏時間可在1年以上,。由于甘油本身十分粘稠,，很難定量，因此一般將甘油和生理鹽水按1:1的比例配成終濃度為50%的甘油溶液,。使用時,，按50%甘油：菌液=1:1的比例混合，使甘油終濃度在20-30%即可,，甘油濃度過高或過低都不利于菌種保藏,。將甘油菌種轉移至-80℃冰箱長期凍存。需要取用菌種的時候,，將凍存管放在37℃水浴中快速解凍，直到菌種wan全融化,，此時可取出菌種進行實驗,。

此方法適用范圍廣，操作簡單,，保藏期長,，菌種不容易發(fā)生變異。

二,、斜面保菌法

將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上,，待菌充分生長后轉移至4℃冰箱中保藏。保藏的時間根據(jù)微生物的種類而不同,，一般霉菌,、放線菌及產(chǎn)芽孢的細菌保存2-4個月就需要移種一次，酵母菌為兩個月,，而細菌最好一個月移種一次,。需要取用菌種的時候,，可用接種環(huán)在斜面上挑取少量菌體進行接種。

此方法的優(yōu)點是操作簡單,，使用方便,，不需特殊設備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡,、變異或污染雜菌等,。缺點是保藏期短，菌種容易變異,，因為培養(yǎng)基的物理和化學性質不是嚴格恒定的,，屢次傳代會使微生物的代謝發(fā)生改變，且此方法污染雜菌的機會較高,。

三,、穿刺保菌法

準備一管半固體培養(yǎng)基，用接種針挑取菌種,，自半固體培養(yǎng)基的中心垂直刺入,，直至接近試管底部，但不要穿透,，然后沿原穿刺線將接種針退出,，于4℃冰箱保存。此方法同斜面保菌法一樣需要定期移種,。

四,、液體石蠟覆蓋保藏法

此方法是斜面保菌的輔助方法。將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上,，待菌充分生長后注入無菌液體石蠟,，使其覆蓋整個斜面，再直立放置在4℃冰箱中保藏,。液體石蠟可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡,，同時可以讓菌體與空氣隔絕，減弱菌種的代謝作用,，延長保藏時間,。需要取用菌種時，用接種環(huán)從斜面上挑取少量菌種即可,。

此方法的優(yōu)點是操作簡單,，不需要特殊的設備，且不需要頻繁移種,，保藏時間較長,。缺點是保存時必須直立放置，占用空間較大。

五,、沙土保藏法

將培養(yǎng)好的菌種與無菌沙土混合,，使菌體吸附在沙土載體上，干燥后轉移至4℃冰箱保存,。需要取用菌種的時候,，取出少量沙土顆粒即可。

此方法操作簡單,，菌種的保藏時間長,。

六、冷凍干燥法

將菌種冷凍,，在減壓下利用升華作用去除水分,，使細胞的生理活動趨于停止，從而使菌種長期維持存活的狀態(tài),。需要取用菌種的時候,，用無菌水或培養(yǎng)基重懸菌體，將菌懸液轉移至固體培養(yǎng)基平板上進行培養(yǎng),。

此方法適用于菌體的長期保存,，但是相關的設備和操作相對其他幾種保藏方法都比較復雜。

七,、瓷珠保菌法

微基生物在以上幾種保藏方法的基礎上開發(fā)出了瓷珠保菌法,，相對傳統(tǒng)的保藏方法保菌的效果更好，而且取用方便,，可降低菌種因反復凍融而受到的傷害,。

瓷珠凍存管中包含12顆磨砂瓷珠和菌種保存液。挑取對數(shù)生長期的菌種轉移至凍存管中,，上下顛倒混勻,，此時菌種會均勻分布在保存液中。用移液器吸出保存液,，此時在表面張力的作用下,，每顆瓷珠表面都會覆蓋一層保存液，而菌種就保存在這層保存液中,。將含有菌種的凍存管轉移至-80℃冰箱即可長期凍存（一般可保存約1年）。

需要取用菌種時,，從-80℃冰箱中取出凍存管,，輕輕搖晃使瓷珠分散開，挑取一顆瓷珠接種至培養(yǎng)基平板上進行劃線培養(yǎng),，或接種至液體培養(yǎng)基中進行搖菌培養(yǎng),。接種完成后，迅速將凍存管放回冰箱中。

針對厭氧菌株,，我們也能夠提供含有還原劑的厭氧性保存液,，并對菌種采用真空包裝，避免菌種因接觸氧氣而死亡,。