反相c18色譜柱液相色譜分析中,色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞,,選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發(fā)所需的時間,,并且使方法更具穩(wěn)定性,。
反相c18色譜柱的參數(shù)可以給我們提供一個初步的選擇,,但由于各個儀器廠商的填料技術(shù)和鍵合技術(shù)都有差異,。即使都是C18柱,不同品牌,、同一品牌不同系列都有不同的功能,,有能耐受低pH值的、有耐高溫的,、有適合堿性樣品的等等,。
反相c18色譜柱的粒徑,影響色譜分離度,。粒徑越小,,分離越快,柱效越高,,但柱壓力越高,,柱容易被污染,導(dǎo)致柱壽命降低,。常見分析柱通常使用5um填料,復(fù)雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑,,更大內(nèi)徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑,。
如果固定相選擇是正確,但是分離度不夠,,那么選用更小的粒度的填料是很有用的,。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,,3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍,,因此如何選擇填料粒徑需要根據(jù)現(xiàn)實情況而定。
反相c18色譜柱的封端:用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來,,以減少殘留的硅醇基,,減輕待測組分與酸性硅羥基反應(yīng)而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象。尤其對于極性樣品而言,未封端處理的色譜柱分離效果較差,。
液相色譜柱的活化操作,,以常見的C18反相分析柱為例,出廠時一般都封裝有甲醇或乙腈等有機溶劑,。隨著時間的推移,,色譜柱內(nèi)的有機溶劑緩慢揮發(fā),色譜柱內(nèi)可能出現(xiàn)氣泡,。因此,,新購買的色譜柱在使用前一般都要進行活化操作。
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