取人或動物體內(nèi)（或胚胎）的組織，將其剪碎至1mm3的組織塊,，再采用的如下方法進行分離培養(yǎng)：

一,、懸浮細胞的分離方法

1、將血液,、羊水,、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘,。

2,、去掉上清，離心沉淀用無鈣,、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘,。此步重復兩次。

3,、用培養(yǎng)基重懸,，調(diào)整適當細胞濃度后分瓶培養(yǎng)。

4,、如選用懸液中某種細胞,，可采用離心后的細胞分層液收獲目的細胞。

二、實體組織材料的分離方法

（一）機械分散法

1,、纖維成分很少的腦組織,，部分胚胎組織，用剪刀剪碎至1mm

³的組織塊,。

2,、用PBS清洗兩次后

①用吸管吹打，分散組織細胞,。

②或?qū)⒁殉浞旨羲榉稚⒌慕M織放在注射器內(nèi)（用九號針）,，使細胞通過針頭壓出,。

③或在不銹鋼紗網(wǎng)內(nèi)用鈍物（注射器鈍端）壓擠使細胞從網(wǎng)孔中壓擠出,。

3、收集細胞轉(zhuǎn)入離心管中,，1000rpm/分鐘離心5分鐘,。

4、去上清,，加入含血清的培養(yǎng)基,，重懸后移至培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

（二）消化分離法

1,、酶消化分離法（過夜冷消化法）

①細胞間質(zhì)較少的軟組織,，如肝、腎,、甲狀腺,、羊膜、胚胎組織,、上皮組織等,，用Hanks液清洗組織三次，剪成碎塊大小為4毫米左右,。

②再用Hanks液洗2-3次以除去血球和脂肪組織,。

③加入0.25%的胰蛋白酶，搖勻后放4℃過夜,。

④次日再用Hanks液洗滌,，棄去上清，共洗2-3次,。

⑤加入少量含血清的培養(yǎng)基吹打分散,，細胞計數(shù)，按適當?shù)臐舛确制颗囵B(yǎng),。

2,、非酶消化法（EDTA消化法）

①把組織塊剪碎，呈1mm

³大小的組織塊。

②將碎組織塊在平皿中用無鈣鎂PBS洗2-3次,。

③加入消化液（胰蛋白酶或膠原酶或EDTA）于37℃水浴中作用適當時間（中間可輕搖1~2次）,，若組織塊膨松呈絮狀可終止，若變化不大可更換一次消化液,，繼續(xù)消化直至膨松絮狀為止,。

④棄去上清，加入含有鈣,、鎂離子的培養(yǎng)基中止消化反應,，并洗滌2-3次后，加入*培養(yǎng)基,。

⑤用吸管吹打,，使細胞充分散開后用紗網(wǎng)過濾后分瓶培養(yǎng)。