疑難解答

•是否還需要往H1細(xì)胞專用培養(yǎng)基中補(bǔ)充或添加成分,？

不需要,。H1細(xì)胞培養(yǎng)基中各個成分的質(zhì)量和濃度都經(jīng)過了優(yōu)化實(shí)驗(yàn),，支持人ESC/iPSC的長期培養(yǎng),，無需再自行添加。

•培養(yǎng)基中有沉淀狀物質(zhì)是否是質(zhì)量問題,？

添加劑在解凍過程中,，若有少量沉淀析出，屬于正?，F(xiàn)象,，不影響使用，請充分混勻后與基礎(chǔ)培養(yǎng)基混合,。但添加劑不能在37℃解凍,，否則會析出大量沉淀，影響培養(yǎng)基的效價,。如果培養(yǎng)基中出現(xiàn)大量沉淀,，請不要使用。

•是否能在37 ℃反復(fù)水浴H1細(xì)胞專用培養(yǎng)基,？

不能,。頻繁地在4℃和37℃之間轉(zhuǎn)換會導(dǎo)致H1細(xì)胞專用培養(yǎng)基中含有的因子失活，H1細(xì)胞專用培養(yǎng)基在使用前平衡至室溫即可,。

• H1細(xì)胞在傳代后不貼壁怎么解決,？

造成H1傳代后不貼壁的最可能的原因：

① 細(xì)胞消化時間不合適；②消化后吹打次數(shù)不合適,，使得完成傳代后細(xì)胞集落過大或過小,。

• H1分化怎么處理？

① 細(xì)胞在剛復(fù)蘇或傳代時,，小的細(xì)胞團(tuán)不呈現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的克隆形態(tài),，培養(yǎng)幾天或傳代后可恢復(fù)。②如果H1分化的表現(xiàn)為干細(xì)胞克隆形態(tài)良好,，克隆周邊出現(xiàn)散在的分化細(xì)胞,，可通過高比例傳代（≥1:10）,，使得分化細(xì)胞的密度減少，低密度的分化細(xì)胞可被H1培養(yǎng)體系篩選去除,，如未全去除,，可用細(xì)胞刮或巴斯德管刮除。

② 如果H1分化的表現(xiàn)為克隆內(nèi)部松散,，邊緣不平滑,，在分化比例小或分化不嚴(yán)重的情況下，可通過連續(xù)傳代2 ~ 3次恢復(fù),，如果分化嚴(yán)重,，建議棄除。

• 細(xì)胞復(fù)蘇率低是什么原因,？

細(xì)胞復(fù)蘇需使用H1細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)基,，可大大提高細(xì)胞的復(fù)蘇效率。復(fù)蘇過程中,，轉(zhuǎn)移細(xì)胞,、吹打混勻和重懸細(xì)胞時，吹打力度要輕柔,，并盡量減少吹打次數(shù),，細(xì)胞接種后，即刻在顯微鏡下觀察細(xì)胞團(tuán)塊的大小,，4 ~ 10個細(xì)胞的團(tuán)塊為最佳,。如果吹打力度過大或次數(shù)過多，導(dǎo)致細(xì)胞分散成單細(xì)胞,，細(xì)胞復(fù)蘇率將偏低,。

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