淺談?dòng)绊憻晒舛縋CR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的幾大因素

首先什么是PCR呢,？

PCR的全稱是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（英文全稱：Polymerase Chain Reaction），是一種體外酶促合成特異DN的方法,，也可以稱作無細(xì)胞分子克隆或DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增技術(shù),。它不僅可用于基因分離,，克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究，還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的地方,。

PCR分為定性PCR和定量PCR兩類：定性PCR只能通過終點(diǎn)法對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行定性分析,，而不能進(jìn)行定量分析；定量PCR能通過加入的熒光分子信號(hào)的變化來實(shí)現(xiàn)對(duì)PCR產(chǎn)物的實(shí)時(shí)檢測(cè),。相對(duì)來說,，定量PCR的檢測(cè)靈敏度更高；特異性好,，準(zhǔn)確性高,；線性關(guān)系好，范圍寬,；操作更簡(jiǎn)單安全,。

PCR實(shí)驗(yàn)的基本因素及過程反應(yīng)成分：引物，酶,，模板DNA,，dNTP，Mg2+鎂離子濃度 ,。

反應(yīng)過程：1,、模板變性；2,、引物退火,；3、新鏈延伸,。

這三個(gè)步驟為一個(gè)循環(huán),，每一個(gè)循環(huán)度產(chǎn)物均可作為下一個(gè)循環(huán)度模板，經(jīng)過n次循環(huán)后,，目的DNA以2n的形式增加,。

除了以上五個(gè)主要因素外，還有實(shí)驗(yàn)耗材因素和溫度因素：

1：首先PCR實(shí)驗(yàn)試劑的總體積一般為25ul~100ul,，因此所選用的耗材必須是吸附低的,；

2：PCR實(shí)驗(yàn)需要高溫解鏈,，低溫合鏈，中溫延伸,，因此要求所選用的耗材需要有很好的熱傳導(dǎo)率,；

3：PCR實(shí)驗(yàn)需要不斷的循環(huán)升溫，降溫,，這就要求所選用的耗材必須有良好的氣密性,；

4：PCR實(shí)驗(yàn)還需要循壞的收集數(shù)據(jù)，需要選用的耗材有良好的均一性,。

5：另外根據(jù)實(shí)驗(yàn)使用儀器的不同,，熒光定量實(shí)驗(yàn)中熒光讀取方式不同，對(duì)耗材還有以下不同的要求：

  a:采用頂部熒光照射并于頂部回收熒光的儀器,，要求管蓋或者封板膜必須是光學(xué)透光的性能,，同時(shí)管壁最好選擇不透光材質(zhì)；

  b：采用側(cè)方熒光照射并于頂部回收熒光的儀器,，要求管蓋或者封板膜必須是光學(xué)透光性,，同時(shí)管壁也要是高透光的透明材質(zhì)；

  c：采用側(cè)方熒光照射并于側(cè)方回收熒光的儀器,，要求管蓋或者封板膜最好選用不透光材質(zhì),，同時(shí)管壁選擇高透光的透明材質(zhì)。