生物樣本是醫(yī)學研究的重要資源,,其質(zhì)量在很大程度上決定著臨床結(jié)果的準確性和可靠性。目前生物樣本及其提取產(chǎn)物主要有深低溫和常溫兩大類保存方式,,針對不同科研的需求,,更多的樣本保存方式也相繼問世,本文將對常用的樣本保存方式及運輸條件進行小結(jié),,可以收藏保存?zhèn)溆谩?/span>
樣本儲存條件
1. -196℃,、-150℃ 深低溫凍存
超低溫凍存是理想的樣本保存方法,目前液氮(-196℃)是靠譜的樣本保存方法,,然而由于樣本浸沒在液氮中,,游離的組織碎片可能帶來交叉污染的潛在風險,因此催生了氣相液氮(-150℃)的保存方式,,就是將樣本置于液氮以上、氣相液氮的包圍之中,,可以很好地避免交叉污染的風險,。另外,也可以通過電力冰箱制冷達到-150℃的低溫效果,,從而能滿足樣本的長期保存需求,。因為-137℃是水玻璃化溫度,低于此溫度時細胞內(nèi)能導致內(nèi)容物降解的一切生化反應均處于失活狀態(tài),,從而能達到長期保存的要求,。
2. -80℃
-80度低溫保存是凍存核酸較為理想的樣本保存方法:在不具有液氮保存條件的生物樣本庫,也可以考慮使用-80℃深低溫冰箱來保存組織樣本,。有研究表明,,在-80℃條件下,DNA產(chǎn)量,、完整性以及RNA產(chǎn)量可以維持長達7年不發(fā)生明顯改變,,但是RNA完整性在凍存5年后開始下降。因此建議保存組織時候進行分裝,,再加入RNA特異性穩(wěn)定劑后凍存于-80℃,,更有利于組織內(nèi)RNA的保存。
關(guān)于蛋白質(zhì)的保存,,目前也以深低溫凍存為主,,可以很好地保護其穩(wěn)定性,。短期儲存也可以保存在-20°C的低溫冰箱中。
3. 常溫保存:鑒于深低溫凍存的運輸與操作的不便性,,常溫保存的方法應運而生,。常溫保存技術(shù)的原理可類比線蟲的脫水休眠現(xiàn)象,利用某些特殊技術(shù)或容器將脫水干燥后的樣本置于密閉環(huán)境中,,或者向生物樣本中添加保護劑,,使相關(guān)酶失活,從而達到常溫環(huán)境下保護樣本的目的,。
樣本的運輸條件01 全血/血漿/血清/干血片
DNA: 24h內(nèi)可室溫運送至實驗室,,72h內(nèi)運輸至實驗室置于2-8℃條件,72h及更長時間的運輸需要在-20℃條件下,。
RNA:4h內(nèi)分離血漿,,5天內(nèi)能夠運輸至實驗室可保存在2-8℃,5天及更長時間運輸時需在-20℃條件下,。
干血片可在室溫下運輸,。
02 肺泡灌洗液
24h內(nèi)可室溫運輸至實驗室,72h內(nèi)需在2-8℃冷藏運輸,,72h及更長時間運輸需采用-70℃或為更嚴格的條件,。
03骨髓
骨髓標本應在2-8℃條件下運輸,如果用于RNA分析,,應該添加RNA穩(wěn)定劑,。
04 口頰細胞
室溫條件下,核酸可穩(wěn)定存在1周,,可室溫運輸,,檢測RNA,需放置在RNA穩(wěn)定劑中,。
05 淋巴細胞層
從血液里分離的淋巴細胞,,需在2-8℃冷藏運輸,無法及時提取時應放置-70℃以下儲存,。
06 腦脊液
DNA病毒檢測: 需在2-8攝氏度條件下運輸,,應該保存在-20℃或-70℃或者更低溫度條件下。
RNA分析:立即置于冰上降溫,,并置于干冰上運輸至實驗室,。
07 細針抽取物
DNA病毒檢測: 需在2-8℃條件下運輸,應該保存在-20℃或-70℃或者更低溫度條件下,。
RNA分析:立即置于冰上降溫或置于RNA穩(wěn)定劑中進行運輸,。
08 組織
DNA分析:新鮮組織應該立即置于-20℃,并保持在冰上運輸保存。
RNA分析:新鮮組織采集后立即采用液氮速凍,,進行運輸保存,。
石蠟包埋組織可室溫運輸保存。
09 痰液
30min內(nèi)可在室溫下運輸至實驗室,,否則應在4-8℃條件下運送
010 糞便
可借助糞便收集盒及糞便采集管進行采集,,黃豆粒大小樣本即可。4h內(nèi)進行核酸提取或-80℃低溫保存,。
011 宮頸和尿道拭子
在檢測試劑廠家推薦的運送培養(yǎng)基中運輸,。
012 植物組織樣本
采集體態(tài)正常的新鮮樣本放入樣本袋中做好標記;樣本若有泥土一般需要洗滌,,之后對其進行干燥并盡快進行核酸提?。怀鼗蛘?20℃進行運輸保存,。
這里需要注意的是樣本儲存在穩(wěn)定的條件下,,應避免反復凍融。
蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司提供的實驗室冰箱,、超低溫冰箱,,低溫存儲箱、液氮罐,、-80冰箱廣泛應用于生物樣本保存,、生物試劑保存等。
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