用什么熒光燈可以看GFP綠色熒光蛋白?
LUYOR-3415RG便攜式雙波長熒光燈可與熒光蛋白觀察眼鏡luv-30A或 luv-50A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白(GFP)或紅色熒光蛋白(RFP)。激發(fā)光源與觀察眼鏡LUV-30A共同使用,,可在動物設(shè)備的固定位置如層流柜直接觀察綠色熒光蛋白(GFP),。LUYOR-3415RG激發(fā)光源使用鋰電池組供電,可與觀察鏡luv-30A 或 luv-50A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白(GFP)或黃色熒光蛋白(YFP),。
綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein,,GFP)
綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)是一類存在于腔腸動物體內(nèi)的生物發(fā)光蛋白,。GFP具有多種優(yōu)點(diǎn):易于檢測,,靈敏度高;熒光性質(zhì)穩(wěn)定,,耐受性強(qiáng),;易于表達(dá),,無細(xì)胞毒性;可用于活細(xì)胞檢測,。因此,,GFP可作為報告基因用于檢測基因表達(dá)或調(diào)控,或作為融合標(biāo)簽來檢測蛋白質(zhì)分子的定位,、遷移,、構(gòu)象變化以及分子間的相互作用,或者靶向標(biāo)記某些細(xì)胞器,。
GFP吸收的光譜峰值為395nm(紫外),,并有一個峰值為470nm的副吸收峰(藍(lán)光);發(fā)射光譜峰值為509nm(綠光),,并帶有峰值為540nm的側(cè)峰(Shouder),。雖然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于該激發(fā)光對細(xì)胞的傷害更小,,因此通常多使用該波段光源(多為488nm),。此外,GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽(FITC)很相似,,兩者通常共有一套濾光片,。GFP熒光極其穩(wěn)定,,在激發(fā)光照射下,,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素強(qiáng),特別是在450~490nm藍(lán)光波長下更穩(wěn)定,。
類似的,,GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠(yuǎn)比熒光素標(biāo)記的熒光抗體高,抗光漂白能力強(qiáng),,因此更適用于定量測定與分析,。由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物,因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報告蛋白,,其作用是任何其它酶類報告蛋白WFBL的,。但因為GFP不是酶,熒光信號沒有酶學(xué)放大效果,,因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白,,比如螢火蟲熒光素酶等。
觀察GFP熒光蛋白方法有:
1.便攜式GFP激發(fā)光源:
采用便攜式GFP激發(fā)光源(又叫熒光蛋白觀測鏡)是zui便捷,、zui方便的觀察方法,,因GFP在470nm有一個很高的吸收峰,采用 470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光,,在觀察gfp熒光時,,因為激發(fā)光為強(qiáng)烈的藍(lán)色光線,,必須佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號。推薦使用美國路陽LUYOR-3415或LUYOR-3410便攜式激發(fā)光源,。
上圖為采用便攜式GFP激發(fā)光源觀察到的效果
2. 紫外光源(紫外熒光燈):
采用紫外光源(又叫紫外線燈,、黑光燈)觀察也非常方便,但如果觀察植物,,植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會發(fā)出熒光,,對gfp發(fā)出的熒光也會產(chǎn)生干擾,另外,,標(biāo)本長時間在紫外光源照射下對GFP標(biāo)本組織也會造成破壞,。
LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源可野外、實驗室原位測定GFP(綠色熒光蛋白),。通過定點(diǎn)觀察GFP,,可有利于學(xué)習(xí)如何操縱和提高有用的染色體特性,從而可以篩選出高基因表達(dá)的植物,。
LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源的應(yīng)用:
1,、 野外、實驗室原位測定GFP(綠色熒光蛋白),。
2,、 應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因作物研究。
3,、 區(qū)別可遺傳性改良生物體和不可遺傳的改良生物體,。
4、 用于基因表達(dá)的研究,。
5,、 用于Rhodamine(紅色熒光染料)、葉綠素,、熒光素的研究,。
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