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行為實(shí)驗(yàn)指南之懸尾實(shí)驗(yàn)(Tail suspension test)

來源:長沙百眾生物科技有限公司   2023年01月31日 11:47  

實(shí)驗(yàn)介紹     

懸尾實(shí)驗(yàn)(Tail suspension test, TST)是一種經(jīng)典而又能快速評(píng)價(jià)抗抑郁藥物,、興奮藥物,、鎮(zhèn)靜藥物藥效的方法。該動(dòng)物模型將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的尾部進(jìn)行固定,,使其頭部向下懸掛,,動(dòng)物在該環(huán)境中掙扎,,企圖擺脫該困境,,在經(jīng)過努力仍無法擺脫后,出現(xiàn)間斷性不動(dòng),,顯示“行為絕望”狀態(tài),。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在該環(huán)境中拼命掙扎試圖逃跑又無法逃脫,,從而提供了一個(gè)無可回避的壓迫環(huán)境,一段時(shí)間的實(shí)驗(yàn)后,,記錄處于該環(huán)境的動(dòng)物產(chǎn)生絕望的不動(dòng)狀態(tài)過程中的一系列參數(shù),,動(dòng)物的表現(xiàn)出的這種典型的“不動(dòng)狀態(tài)”,反映了一種被稱之為“行為絕望狀態(tài)”,,這種行為絕望模型與抑郁癥類似,,而且對(duì)絕大多數(shù)抗抑郁藥物敏感,而且其藥效與臨床藥效顯著相關(guān),,所以被廣泛用于抗抑郁藥物的初選,。

 

     實(shí)驗(yàn)工具     

 

懸尾裝置,醫(yī)用膠帶,,VisuTrack攝像跟蹤系統(tǒng)以及分析軟件(上海欣軟)。推薦使用塑料懸尾實(shí)驗(yàn)箱,,尺寸通常為55cm高* 60cm*寬* 11.5cm深,。為了防止動(dòng)物之間的觀察或相互作用,實(shí)驗(yàn)箱中間有一個(gè)擋板實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隔開,。同時(shí)保證每只動(dòng)物的隔間足夠?qū)挸?,讓?dòng)物碰不到懸尾箱的箱壁。每個(gè)隔間的尺寸建議不低于:55cm高* 15cm*寬* 11.5cm深這個(gè)尺寸,。小鼠的鼻子和實(shí)驗(yàn)室箱子的地板之間的大致距離建議為20-25厘米,。分析軟件推薦使用VisuTrack動(dòng)物行為分析軟件軟件可任意截取視頻,,準(zhǔn)確性高,。懸尾實(shí)驗(yàn)與曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)等測(cè)試不同,不應(yīng)該跟蹤動(dòng)物的質(zhì)心/重心,。VisuTrack動(dòng)物行為分析軟件(上海欣軟)通過調(diào)查小鼠四肢的真實(shí)動(dòng)作,,實(shí)時(shí)分析小鼠搖擺(絕望狀態(tài))、掙扎行為等指標(biāo),,自動(dòng)存儲(chǔ)原始實(shí)驗(yàn)視頻并可進(jìn)行分析,,減少了人為誤差

 

     測(cè)試方法與指標(biāo)     

 

測(cè)試方法:

1)  將已在動(dòng)物房適應(yīng)了三天的動(dòng)物從SPF動(dòng)物房中拉入實(shí)驗(yàn)室,。SPF級(jí)動(dòng)物房應(yīng)設(shè)置的參數(shù)為室溫(22±2℃),,濕度(40±20℃)%,12 h 晝夜交替燈光使動(dòng)物有正常晝夜節(jié)律,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在此環(huán)境可自由攝取食物和水,。

2)  將動(dòng)物輕柔地從籠中拿出來,以最快的速度將其尾巴固定好,,不得給小鼠造成多余的壓力和應(yīng)激狀態(tài),。具體操作為用醫(yī)用膠帶粘在距離尾巴尖-端 1 cm,,以便將動(dòng)物的尾巴從裝置懸掛桿上懸吊下來。動(dòng)物尾巴尖-端與地面之間的高度約為 30 cm,,使小鼠呈頭倒式位,。

3)  攝像鏡頭需提前調(diào)好,將其調(diào)到水平對(duì)準(zhǔn)小鼠身體的位置,,以便錄像可呈現(xiàn)完-全的視野,。

4)  實(shí)驗(yàn)總共需錄視頻 6 min,錄像記錄動(dòng)物實(shí)驗(yàn)期間的行為,,但記錄后4min動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間,。

5)  記錄時(shí)長完成后,撕去醫(yī)用膠布將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小心取下來,,并放回原籠中做好記錄,。

6)  所有動(dòng)物測(cè)試完成后,及時(shí)清理儀器中的糞便和尿液,。

主要的指標(biāo)及行為學(xué)意義:

1)  肢體不動(dòng):當(dāng)動(dòng)物停止掙扎時(shí),身體保持垂直倒懸狀態(tài),靜止不動(dòng),,這個(gè)指標(biāo)可視為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)習(xí)得性無助后放棄掙扎的行為表現(xiàn)。動(dòng)物在懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間越長,,表明動(dòng)物的抑郁程度越重,。

2)  掙扎行為:當(dāng)動(dòng)物出現(xiàn)企圖掙扎、起身時(shí)的行為,,動(dòng)物的掙扎時(shí)間越短,,表明動(dòng)物的抑郁程度就更重。

數(shù)據(jù)如何統(tǒng)計(jì):

記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的掙扎行為和不動(dòng)時(shí)間,,一般換算為以秒為單位的計(jì)量,。通過與對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比,一般使用T檢驗(yàn)即可,,至于是否選擇配對(duì)或未配對(duì)則需要跟自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩磉x擇,,此處不展開說明。

 

     實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)     

 

(測(cè)試時(shí)長,、是否可重復(fù),、大小鼠的差異、品系)

1.膠帶要纏在接近動(dòng)物尾巴尖-端的地方,,不要纏在靠近尾巴根部的地方,,這樣會(huì)影響動(dòng)物的活動(dòng)。若太靠下動(dòng)物的掙扎與活動(dòng)會(huì)受到限制,,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

2.背景板要與動(dòng)物的顏色形成強(qiáng)烈反差,以便軟件識(shí)別,,推薦使用白光背光板,。例如用白色小鼠時(shí),,需要選用黑色的背景板,以便視頻錄制清晰,,易分辨,;反之亦然用黑色的c57小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),,則需要考慮用白色的背景板來完成襯托和凸顯,。

3.不同品種的小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)不同:例如空白對(duì)照c57小鼠不動(dòng)時(shí)間較長,均值多大于100s; 空白對(duì)照組的ICR 小鼠不動(dòng)時(shí)間均值多小于100 s; 抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn):不動(dòng)時(shí)間與對(duì)照組相比有顯著性增加(P < 0. 05)即可,并不需要單純比較不動(dòng)時(shí)長,。

4.懸尾實(shí)驗(yàn)不建議用較重的大鼠,,因?yàn)榇笫笾荒芡ㄟ^它們的尾巴來支持它們的體重,這對(duì)大鼠來說是痛苦的,。同樣的道理,,應(yīng)該注意避免使用異常重的小鼠(例如用于模擬肥胖的小鼠),在這種情況下,,實(shí)驗(yàn)者應(yīng)該尋找替代性的測(cè)試,,例如強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。

5.動(dòng)物從飼養(yǎng)環(huán)境帶入實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)適應(yīng)一段時(shí)間,,通常至少一個(gè)小時(shí)以上

6.實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)保持安靜,,突然大或者一直持續(xù)的噪音會(huì)使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物驚慌失措,。

7.小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間通常為6分鐘。與強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不同,,小鼠在實(shí)驗(yàn)初期更容易表現(xiàn)出不動(dòng),。

8. 底部建議放置一個(gè)可拆卸的拖盤,收集糞便或尿液,。

9. 懸掛后動(dòng)物鼻尖與設(shè)備地板之前的參考距離在 20~25 cm 左右,。

10.短時(shí)間不建議將此實(shí)驗(yàn)重復(fù)第二遍,以免對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心理狀態(tài)產(chǎn)生影響,。

11.測(cè)試中,,前肢只有小鼠運(yùn)動(dòng),后肢不動(dòng),,視為動(dòng)物的絕望狀態(tài),。

12.由于運(yùn)動(dòng)的慣性,小鼠的鐘擺式活動(dòng)也需要視為動(dòng)物的絕望狀態(tài),。

13.懸尾與強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)相比,,該實(shí)驗(yàn)沒有因浸泡在水中而導(dǎo)致體溫降低的風(fēng)險(xiǎn)。這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)在靈敏度和性能上有各種重要的差異,,一個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可能無法在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中重復(fù),,故應(yīng)理性看待實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

14.懸掛用的膠帶應(yīng)牢固地粘貼在小鼠尾部和懸掛桿上,并且足夠堅(jiān)固以承受正在測(cè)試的小鼠的重量,。但是,膠帶不應(yīng)該過于粘滯應(yīng)保證既可以順利固定動(dòng)物,,又不至于在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后難以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尾部移除,,膠帶尺寸可盡量統(tǒng)一

15.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后(通常是 6 分鐘),,將動(dòng)物放回鼠籠,,應(yīng)輕輕將膠帶從尾巴上拉下來,不要從尾巴上撕扯膠帶,,避免給動(dòng)物帶來痛苦,。

16.清潔用品,每次實(shí)驗(yàn)完成,,收集糞便和尿液,,徹-底擦拭懸掛盒等儀器設(shè)備。

17.在實(shí)驗(yàn)前幾天和后幾天推薦測(cè)試動(dòng)物的行動(dòng)能力,,如自發(fā)活動(dòng)等,。目的是為了排除動(dòng)物自身運(yùn)動(dòng)能力的影響,而更加說明是動(dòng)物的抑郁程度不同而產(chǎn)生不動(dòng)或掙扎樣行為,。

18.本實(shí)驗(yàn)在短期內(nèi)不建議重復(fù),,若必須重復(fù)一般建議兩次實(shí)驗(yàn)間隔半個(gè)月以上。

19.若是多只動(dòng)物同一時(shí)間段做實(shí)驗(yàn),,則需要注意每只動(dòng)物的間隔,,以及動(dòng)物與動(dòng)物之間需要用不透明的擋板隔開,防止出現(xiàn)干擾,。

 

     實(shí)驗(yàn)心得和經(jīng)驗(yàn)     

 

懸尾實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單,,時(shí)間短,,在一段時(shí)間內(nèi)出數(shù)據(jù)的效率很高。比起強(qiáng)迫游泳,,關(guān)于溫度沒有什么太需要注意的地方,,但一定要注重動(dòng)物福利的落實(shí)和準(zhǔn)確識(shí)別不動(dòng)狀態(tài),做到識(shí)準(zhǔn),、記準(zhǔn),。

進(jìn)一步探討與展望:

懸尾試驗(yàn)非常適合測(cè)量引起急性抑郁,。各種類型的抗抑郁藥物,,如三環(huán)類藥物,、選擇性血清素再攝取抑制劑 (SSRI) 和單胺氧化酶抑制劑 (MAOI),、精神興-奮-劑、精神安定藥,、抗焦慮藥等,,都已使用懸尾試驗(yàn)進(jìn)行了測(cè)試該模型和強(qiáng)迫游泳模型一樣可靠,,在抑郁等藥物評(píng)價(jià)體系中占有不可替代的位置,。

 

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