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超濾離心管的使用注意事項

來源:上海聯(lián)碩生物科技有限公司   2023年01月10日 11:51  

超濾離心管,,備有四種材質的超濾膜:聚醚砜,、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart,,可根據(jù)不同要求靈活選用

使用注意事項:
(1)選擇合適的超濾管,。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管,。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管,。認真閱讀使用說明書,,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。

(2)新買來的超濾是干燥的,,使用前加入超純水,,水量過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘,。然后將水倒出,,即可加入蛋白液,加入的多少,,以不超過管頂?shù)陌拙€為準,。操作要輕,加入蛋白液前,,超濾管需要插在冰上預冷,。

(3)平衡。質量和重心二者都要達到平衡,。注意轉速和加速度不可太快,,否則直接損壞超濾膜,。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。不同離心機的轉速 rpm換算成g之后,,有所不同,。離心機的加速度調(diào)至檔,減小對膜的壓力,。注意,,一定要等離心機達到目的轉速之后,方可離開離心機,,否則離心機出問題時,,無法第一時間處理。膜與轉軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整(
角轉離心機的情況是膜與軸垂直),。在實際使用中,,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命,。

(4)當濃縮到剩下1ml時,,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,,看有沒變藍色,,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾,。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,,再取流穿,,跑蛋白膠或Bradford粗測,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,,防止蛋白受熱),,直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,,導致堵管,。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適,;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,,后者的方法是換不同的緩沖溶液,,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。

(5)前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經(jīng)0.22um超濾膜超濾),,再 濃縮至1ml左右,,連續(xù)三次,最后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定,,一般不多于500ul,,也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,,三次達到1000倍以上,,基本上可以達到換buffer的目的。

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