本生帶您了解：固相萃取小柱和色譜柱的區(qū)別

　　固相萃取柱(英文, 簡稱SPE column,，或Solid Phase extraction Cartridges,，簡稱SPE  cartridges)是從層析柱發(fā)展而來的一種用于萃取、分離,、濃縮的樣品處理裝置,。固相萃取柱的容量是指固相萃取柱填料的吸附量。對于以硅膠為基質(zhì)的固相萃取柱，其容量一般在1~5  mg/100 mg,，也就是柱容量是填料質(zhì)量的1%~5%,。

　　色譜是一種分離分析手段，分離是核心,，因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟,。色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相,，以及色譜柱的制備和操作條件,。

　　兩者本質(zhì)上是不同的東西，固相萃取柱是用來做固相萃取用的,，主要作用是過濾和富集樣品,，而液相色譜柱是液相色譜上使用的，用來分析樣品的,。

　　色譜柱的選擇原則

　　高效液相色譜分析中,，色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞，選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發(fā)所需的時間,，并且使方法更具穩(wěn)定性,。

　　現(xiàn)在商品化的液相色譜柱琳瑯滿目，根據(jù)色譜柱的參數(shù)可以給我們提供一個初步的選擇,，但由于各個儀器廠商的填料技術(shù)和鍵合技術(shù)都有差異,。即使都是C18柱，不同品牌,、同一品牌不同系列都有不同的功能,，有能耐受低pH值的、有耐高溫的,、有適合堿性樣品的等等,。

　　要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解,。

　　原則一：看物理性質(zhì)

　　柱長,，內(nèi)徑，如250*4.6mm,。一般柱長在2—250mm,，柱越長，分離度越高,，但柱壓更高,，分離所需時間更長;但分離度與理論塔板數(shù)的平方根成正比，所以一昧增加柱長并不是有效的分離手段,，一般情況下,，150mm,、5um的填料可以提供足夠的塔板數(shù)。

　　粒徑,，影響色譜分離度,。粒徑越小，分離越快,，柱效越高,，但柱壓力越高，柱容易被污染,，導致柱壽命降低,。常見分析柱通常使用5um填料，復雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑,，更大內(nèi)徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。如果固定相選擇是正確,，但是分離度不夠,，那么選用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,，3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍,，因此如何選擇填料粒徑需要根據(jù)現(xiàn)實情況而定。

　　孔徑,，60A,，100A，120A,，300A等,。孔徑小,，則含孔率高,，比表面積大，載碳量高;色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配,，保證分子自由進出填料孔并與孔內(nèi)表面的鍵合相進行分離分配,，通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上，一般小分子使用80—120A,，大分子使用300A,。

　　顆粒形狀，一般有球形和不規(guī)則形,，當使用黏度較大的流動相時,，球形顆粒可以降低柱壓,，延長色譜柱壽命,。

　　比表面積，指的是每克填料的表面積，如180m2/g—350m2/g,，與粒度和含孔率有關(guān);比表面積大,，會增加樣品與鍵合相之間的反應，增加保留和分離度;比表面積小則可以縮短分析時間和平衡時間,，并不是比表面積大或者小就更好,，需要選擇合適的比表面積。

　　原則二：看化學性質(zhì)

　　硅膠基質(zhì)：通用的基質(zhì),，強度大,，化學修飾容易，但使用的pH值范圍有限(一般為2—8,，特殊修飾的可以達到1—12),。

　　聚合物基質(zhì)：多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學穩(wěn)定,，應用pH范圍寬,，具有更強的疏水性，對蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好;但強度較小,，有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損,，批次重復性較差，商品化色譜柱不多,，一般價格較貴,。

　　載碳量：基質(zhì)表面鍵合相的比例，載碳量高,，則保留增加,，適合分析非性化合物。

　　鍵合相：鍵合試劑不同,，對化合物的選擇性不同,，一般長鏈的烷基鍵合相(C18 、C8)比短鏈的(C4,、  C3)穩(wěn)定;非性的鍵合相比性的鍵合相(-NH2)穩(wěn)定,。

　　封端：用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來，以減少殘留的硅醇基,，減輕待測組分與酸性硅羥基反應而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象,。尤其對于性樣品而言，未封端處理的色譜柱分離效果較差,。

　　原則三：看正相,、反相色譜

　　目市場上主要以反相色譜為主，約占80%的比例,。

　　在了解了色譜柱的基本知識后,，色譜柱的選擇也就迎刃而解了

　　原則四：根據(jù)柱長及內(nèi)徑選擇

　　長度的選擇：柱越長,，總柱效越高(n值越大)，柱越長,，分析時間也越長,。250—300mm是普遍的柱長，實驗室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子,，一般用來分離l0到50個組份的中等至復雜混合物;500—600mm,，要求較高分辨率的應用，—般用來分離大于50個組份或包含有難分離物質(zhì)的復雜樣品程序升溫分析,。

　　內(nèi)徑：柱效率與柱半徑平方成反比,，內(nèi)徑越小柱效越高，但內(nèi)徑越大,，柱容量也增加,，允許進樣量就越多。當進樣量超過柱容量時,，則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡,，將會導致色譜蜂畸變，柱分辨率降低,，重現(xiàn)性不好,。因此對于復雜樣品需要精確分離,，必須使用小內(nèi)徑柱子,。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就必須使用內(nèi)徑大的柱子,，目實驗室使用常見的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm,。

　　一般選擇原則：分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱;對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形,，延長色譜柱使用壽命等,。

　　固相萃取柱  本生生物公司供應：ELISA試劑盒,動物血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進口凍存管,細胞培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,進口吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器等。