硅膠色譜柱的使用和儲存說明

來源：廣州太瑋生物科技有限公司 2023年01月06日 11:45

硅膠因其優(yōu)良的機械強度和表面易改性等特征,，已成為應(yīng)用廣泛的色譜柱填料。硅膠柱具有柱效高,、選擇性好及分析速度快等特點,，因而被廣泛用于分離極性小分子如藥物，而用于糖,、肽或蛋白質(zhì)分離較少,。

硅膠色譜柱主要是通過硅膠的硅羥基吸附能力進(jìn)行物質(zhì)的分離,，填充顆粒主要是硅膠，所用溶劑常見的是乙酸乙酯,，石油醚,，不能使用水，對于極性差別比較大的物質(zhì)分離效果好,。

硅膠色譜柱使用方法：

1,、稱量

200-300目硅膠，稱30-70倍于上樣量,；如果極難分,，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右,，所以要稱40g硅膠,，用燒杯量100ml也可以。

2.攪成勻漿

加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分?jǐn)嚢?。如果洗脫劑是石油?乙酸乙酯/丙酮體系,，就用石油醚拌。

3.裝柱

將柱底用棉花塞緊,，不*海沙,，加入約1/3體積石油醚，裝上蓄液球,，打開柱下活塞,，將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi),。隨著沉降,，會有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi)，用石油醚將其沖入柱中,。

4.壓實

沉降完成后,，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓,，直至流速恒定,。柱床約被壓縮至9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱,，都應(yīng)進(jìn)行這一步,，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時由于柱床產(chǎn)生開裂,。

5.上樣

干法濕法都可以,。海沙是沒必要的。上樣后,，加入一些洗脫劑,，再將一團脫脂棉塞至接近硅膠表面,。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面,。

6.過柱和收集

柱層析實際上是在擴散和分離之間的權(quán)衡,。太低的洗脫強度并不好，推薦用梯度洗脫,。收集的例子：10mg上樣量,，1g硅膠H，0.5ml收一餾分,；1-2g上樣量,，50g硅膠（200-300目），20-50ml收一餾分,。

7.檢測

要更多地使用專用噴顯劑,，如果僅用紫外燈，會損失較多產(chǎn)品,，紫外的靈敏度一般比噴顯劑低1-2個數(shù)量級,。

8.送譜

收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結(jié)晶,。如果樣品太少或為液體,，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最后純化手段,?？沙渥V1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。

高純硅膠色譜柱的儲存方法：

1,、避免用純凈水沖洗鍵合致密的C18柱,。

2、防止緩沖溶液和水溶液流動相產(chǎn)生微生物,，做到流動相用多少配多少,，或在水流動相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細(xì)菌成長或在流動相中加20%的有機改性劑，也可抑制微生物生長,，有機改性劑還有助于流動相脫氣,。

3、使用緩沖溶液后的產(chǎn)品,，應(yīng)用15～20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水—有機溶劑流動相沖洗色譜柱,，后換成有機溶劑儲存。

4,、將兩端用堵頭擰好,，以免柱床填料干裂。

5,、盡可能將色譜柱貯存于*有機溶劑中,，避免在緩沖溶液中保存,。

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