細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法

來(lái)源：蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司 2023年01月04日 13:55

細(xì)胞凋亡檢測(cè)常用的儀器設(shè)備主要有光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡,、熒光顯微鏡,、共聚焦激光掃描顯微鏡、透射電子顯微鏡等進(jìn)行觀察,。

一,、光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡

① 未染色細(xì)胞：凋亡細(xì)胞的體積變小、變形,，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,，細(xì)胞凋亡

晚期可見(jiàn)凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮,、變圓,、脫落。

② 染色細(xì)胞：常用吉姆薩染色,、瑞氏染色等,。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,，核膜

裂解,、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。

二,、熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡

一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來(lái)評(píng)判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況,。常用的 DNA 特

異性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI,。三種種染料與

DNA 的結(jié)合是非嵌入式的,，主要結(jié)合在 DNA 的 A-T 堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時(shí)發(fā)射明亮的藍(lán)

色熒光,。Hoechst 是與 DNA 特異結(jié)合的活性染料,，儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1 mg/ml 的濃度，使

用時(shí)用 PBS 稀釋,，終濃度為10 μg/ml,。DAPI 為半通透性，用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色。儲(chǔ)存

液用蒸餾水配成1 mg/ml 的濃度,，使用終濃度一般為10 μg/ml,。

結(jié)果評(píng)判：細(xì)胞凋亡過(guò)程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：Ⅰ期的細(xì)胞核呈波

紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased），部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài),；Ⅱa 期細(xì)胞核的染色質(zhì)

高度凝聚,、邊緣化；Ⅱb 期的細(xì)胞核裂解為碎塊,，產(chǎn)生凋亡小體(圖1),。

三、透射電子顯微鏡觀察

結(jié)果評(píng)判：凋亡細(xì)胞體積變小,，細(xì)胞質(zhì)濃縮,。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的細(xì)胞

核內(nèi)染色質(zhì)高度盤(pán)繞，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象（cavitations）的空泡結(jié)構(gòu)(圖2),；Ⅱa 期細(xì)胞

核的染色質(zhì)高度凝聚,、邊緣化；細(xì)胞凋亡的晚期,，細(xì)胞核裂解為碎塊,，產(chǎn)生凋亡小體。

蘇州阿爾法生物提供的光學(xué)顯微鏡,、倒置顯微鏡,、生物顯微鏡、熒光顯微鏡,、共聚焦激光掃描顯微鏡,、透射電子顯微鏡等廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué),、免疫生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。

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