免疫熒光(IF)是使用顯微鏡深入了解細胞結(jié)構(gòu)和過程的有效方法,，可評估特定蛋白質(zhì)的表達和位置,，使得免疫熒光成為科學家解決許多細胞生物學問題的工具,。

　　免疫熒光實驗基于以下主要步驟：　　

　　1.特異性抗體與感興趣的蛋白質(zhì)結(jié)合?！　?/p>

　　2.熒光染料與這些免疫復合物偶聯(lián),，以便使用顯微鏡觀察感興趣的蛋白質(zhì)?！　?/p>

　　內(nèi)皮細胞中vWF的免疫熒光染色,。肌動蛋白用phalloidin染色(綠色)，細胞核用DAPI染色(藍色),。

　　區(qū)分直接和間接免疫熒光。在直接免疫熒光中,，一抗直接偶聯(lián)到熒光團（也稱為熒光色素）,，便于處理和快速可視化。在間接免疫熒光中,，使用特異性結(jié)合一抗的二級熒光團偶聯(lián)抗體來可視化感興趣的結(jié),。

　　盡管di二種方法比直接免疫熒光更耗時，但它有幾個顯著的優(yōu)勢,，比如它通常更便宜,，因為二抗可以用于不同的一抗,。此外，通過結(jié)合多個一抗和特定的二抗(每個抗體都用不同的熒光團標記),，可以在單個樣品中平行特異地顯示多個蛋白質(zhì)(多色免疫熒光),。　　

　　免疫熒光染色：典型的工作流程

　　每個免疫熒光染色方案由培養(yǎng),、固定,、染色、成像四個主要步驟組成,，可細分如下：　　

　　免疫熒光染色是一種非常敏感的方法,，可能需要排除故障《免疫英冠染色故障排除指南》。方案中的微小變化可能會導致不同的結(jié)果,，而這些結(jié)果不再具有可比性,。因此，在您的特定方案中精確地保持相同的條件是非常重要的(例如,，細胞密度,、抗體稀釋度、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間),?！　?/p>

　　免疫熒光實驗方案對比

　　傳統(tǒng)染色與ibidi方案染色

　　當使用任何ibidi解決方案時，ibidi的免疫熒光染色方案比傳統(tǒng)方案要簡便快速的多,。無需在松散的蓋玻片上生長細胞,，細胞可直接在ibidi玻片上生長和染色?！　?/p>

　　用于免疫熒光應用的各種ibidi產(chǎn)品