1,、 生長培養(yǎng)好的試驗材料（一般為生長20天左右的擬南芥幼苗葉片）

2,、 在擬南芥開花前取樣（30片葉子左右即可）

3、 切取葉片為0.5-1mm的細(xì)條（如果材料能達(dá)到每克10⁷個原生質(zhì)體,， 10-20片葉子需要5-10mL酶解液）

4,、 迅速將切下的樣品轉(zhuǎn)到酶解液中,，要求全部浸沒,。

5、 黑暗條件下抽真空30min,。

6,、 連續(xù)酶解，室溫下23℃黑暗中靜止酶解3h

7,、 利用光學(xué)顯微鏡檢查原生質(zhì)體（30-50μm大?。?/span>

8、 在過濾前加入等量的W5溶液

9,、 洗干凈濾網(wǎng),，并用W5潤濕，之后過濾

10,、 離心100g,，1-2min沉淀原生質(zhì)體,，盡可能吸走上清，重復(fù)洗2 次

11,、 重懸原生質(zhì)體于W5中，保持在2*10⁵個 /ml,，冰浴30min,。

12、 100g離心2min,，盡可能吸走上清,，利用MMG重懸，濃度約 2*10⁵個/ml

13,、 加入10μL質(zhì)粒（1000ng-2000ng ）于2ml離心管中

14,、 加入100μL原生質(zhì)體（2*10⁴個），輕輕混勻,。

15,、 加110μL PEG solution，輕彈使充分混勻

16,、 23℃室溫孵育30min,。

17、 加400-440μL W5混勻,，終止反應(yīng)

18,、 100g，2min 23℃離心,，去上清,，重復(fù)洗一次

19、 用1mL W5重懸原生質(zhì)體并放入6孔板中培養(yǎng)

20,、 20-25℃孵育16h以上

21,、 取樣制片觀察

溶液配制：

1、 酶解液的配制（20ml）

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