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色譜是一種分離分析手段,，分離是核心,，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟,。對(duì)色譜柱的要求是柱效高,、選擇性好,，分析速度快等,。
選購色譜柱一定要認(rèn)真看待，即使都是C18柱,，不同品牌、同一品牌不同系列都有不同的功能,，有能耐受低pH值的,、有耐高溫的,、有適合堿性樣品的等等。
原則一：看物理性質(zhì)
柱長,，內(nèi)徑,，如250*4.6mm,。一般柱長在2—250mm,，柱越長，分離度越高,，但柱壓更高,，分離所需時(shí)間更長;但分離度與理論塔板數(shù)的平方根成正比，所以一昧增加柱長并不是有效的分離手段,，一般情況下,，150mm,、5um的填料可以提供足夠的塔板數(shù),。
粒徑，影響色譜分離度,。粒徑越小,，分離越快，柱效越高,，但柱壓力越高,，柱容易被污染，導(dǎo)致柱壽命降低,。常見分析柱通常使用5um填料,，復(fù)雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑,，更大內(nèi)徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑,。如果固定相選擇是正確,，但是分離度不夠,，那么選用更小的粒度的填料是很有用的,。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而，3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍,，因此如何選擇填料粒徑需要根據(jù)現(xiàn)實(shí)情況而定,。
孔徑,，60A,，100A,，120A,，300A等,。孔徑小,，則含孔率高,，比表面積大,，載碳量高;色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配,，保證分子自由進(jìn)出填料孔并與孔內(nèi)表面的鍵合相進(jìn)行分離分配,，通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上,，一般小分子使用80—120A,，大分子使用300A,。
顆粒形狀,，一般有球形和不規(guī)則形，當(dāng)使用黏度較大的流動(dòng)相時(shí),，球形顆?？梢越档椭鶋海娱L色譜柱壽命,。
比表面積,，指的是每克填料的表面積，如180m2/g—350m2/g,，與粒度和含孔率有關(guān),；比表面積大，會(huì)增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng),，增加保留和分離度,；比表面積小則可以縮短分析時(shí)間和平衡時(shí)間，并不是比表面積大或者小就更好,，需要選擇合適的比表面積,。
原則二：看化學(xué)性質(zhì)
硅膠基質(zhì)：通用的基質(zhì)，強(qiáng)度大,，化學(xué)修飾容易,，但使用的pH值范圍有限(一般為2—8，特殊修飾的可以達(dá)到1—12),。
聚合物基質(zhì)：多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,，化學(xué)穩(wěn)定,，應(yīng)用pH范圍寬,，具有更強(qiáng)的疏水性，對(duì)蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好,；但強(qiáng)度較小,，有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物溶脹而受損，批次重復(fù)性較差,，商品化色譜柱不多,，一般價(jià)格較貴。
載碳量：基質(zhì)表面鍵合相的比例,，載碳量高,，則保留增加，適合分析非極性化合物,。
鍵合相：鍵合試劑不同,，對(duì)化合物的選擇性不同,，一般長鏈的烷基鍵合相(C18 、C8)比短鏈的(C4,、 C3)穩(wěn)定,；非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩(wěn)定,。
封端：用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來,，以減少殘留的硅醇基,，減輕待測(cè)組分與酸性硅羥基反應(yīng)而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象。尤其對(duì)于極性樣品而言,，未封端處理的色譜柱分離效果較差。
原則三：看正相,、反相色譜
| 固定相極性 | 流動(dòng)相極性 | 出峰順序 | |
| 反相吸附色譜 | 非極性 | 強(qiáng)極性（水、甲醇,、乙腈等） | 強(qiáng)極性物質(zhì)先出峰 |
| 正相吸附色譜 | 極性 | 弱極性（己烷、庚烷等） | 弱極性物質(zhì)先出峰 |
原則四：根據(jù)柱長及內(nèi)徑選擇
長度的選擇：柱越長,，總柱效越高(n值越大),，柱越長，分析時(shí)間也越長,。250—300mm是普遍的柱長,，實(shí)驗(yàn)室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子,，一般用來分離l0到50個(gè)組份的中等至復(fù)雜混合物;500—600mm,，要求較高分辨率的應(yīng)用，—般用來分離大于50個(gè)組份或包含有難分離物質(zhì)的復(fù)雜樣品程序升溫分析,。
內(nèi)徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內(nèi)徑越小柱效越高，但內(nèi)徑越大,，柱容量也增加,，允許進(jìn)樣量就越多,。當(dāng)進(jìn)樣量超過柱容量時(shí)，則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡,，將會(huì)導(dǎo)致色譜蜂畸變,，柱分辨率降低,，重現(xiàn)性不好。因此對(duì)于復(fù)雜樣品需要精確分離,，必須使用小內(nèi)徑柱子,。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就必須使用內(nèi)徑大的柱子,，目前實(shí)驗(yàn)室使用最常見的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm,。
一般選擇原則：分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱；對(duì)于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱,，以改善峰形,，延長色譜柱使用壽命等。
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