色譜填料又稱層析介質(zhì),，指填充在色譜柱中具有納米孔道結(jié)構(gòu)的微球材料,，粒徑一般在微米尺度，納米孔道的孔徑大小在5-200 nm范圍內(nèi),。色譜填料的形貌,、結(jié)構(gòu)、粒徑大小和分布,、孔徑大小和分布,、基質(zhì)及表面功能基團(tuán)等都影響著色譜填料的性能，其中基質(zhì)影響著色譜填料的各種物理性能,，比如機(jī)械強(qiáng)度,、載量等，表面功能基團(tuán)則影響著分離模式和分離選擇性,，即色譜填料的使用方向,。色譜填料根據(jù)分離模式可分為預(yù)活化層析填料、凝膠過濾層析填料,、疏水層析填料,、離子交換層析填料、親和層析填料和多模式層析填料等,。

預(yù)活化層析填料可以偶聯(lián)一個(gè)特定的配基,，制備成一個(gè)可以純化一種或者幾種目標(biāo)分子的親和填料。例如,，可以使用抗體,、抗原,、酶、受體,、小的核酸或者多肽作為配基,，純化能與它們結(jié)合的相應(yīng)的配體。

BioToolomics開發(fā)了多種預(yù)活化層析填料,，可以高效,、快速、簡便,、安全地偶聯(lián)各種功能配體,。預(yù)活化填料的基質(zhì)是由瓊脂糖制成的，具有親水性強(qiáng),、非特異性吸附低的特點(diǎn),，并且基質(zhì)已被高度交聯(lián)，具有很高的機(jī)械強(qiáng)度,。

制備預(yù)活化親和層析柱的注意要點(diǎn)：

（一）配基的選擇

通常情況下,，當(dāng)配基分子量＜5 KDa時(shí),，需要間隔臂,；對于大分子配基，間隔臂不是必須的選擇條件,。例如,，NHS活化瓊脂糖層析填料有一個(gè)長間隔臂（11個(gè)原子），特別有助于固定結(jié)構(gòu)受限的配體,。而CNBr則沒有間隔臂,，對于小分子配基（＜5KDa），當(dāng)配基和樣品結(jié)合的時(shí)候,，由于CNBr沒有間隔臂,，可能會(huì)由于空間位阻而影響結(jié)合。因此當(dāng)配基分子量＜5 KDa時(shí),，建議使用NHS活化配基填料,。對于大于5KDa的配基，二者差異不大,。

（二）偶聯(lián)方法的選擇

配基是通過其功能基團(tuán)的反應(yīng)偶聯(lián)到基質(zhì)上,，所以偶聯(lián)方法的選擇取決于配基的特性。NHS,、羧基,、CNBr、醛基活化瓊脂糖填料通過配基的伯胺基團(tuán)進(jìn)行偶聯(lián),，這幾種最主要的區(qū)別是NHS和羧基含有間隔臂,，而CNBr和醛基沒有間隔臂,，此外，NHS和羧基能耐受較高的pH值,。環(huán)氧活化瓊脂糖填料可通過與羥基形成的穩(wěn)定醚鍵固定糖和其他碳水化合物,，它們也可用于偶聯(lián)含伯胺或含硫醇的分子。肼活化瓊脂糖層析填料通過形成穩(wěn)定的腙鍵偶聯(lián)含醛或酮的配體,。

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