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紫外分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜,，來研究物質(zhì)的成分,、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光,。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。
當以空白試劑為參比調(diào)節(jié)儀器零點時,，比色皿窗材料的吸收,、內(nèi)外窗面的散射以及溶劑的吸收等都被抵消，所得吸光度值由顯色溶液中待測離了濃度所決定,。此時吸光度值與試液濃度一般呈線性關(guān)系,。吸光度值與測定濃度不成直線關(guān)系，發(fā)生向下彎曲(負偏離)或向上彎曲(正偏離)的現(xiàn)象而偏離朗伯一比爾定律的主要原因如下,。
(1)非單色光的影響： 紫外一可見分光光度訃使用連續(xù)光源和分光器分光,，不可能得到真正理想的單色光；為保證在測量中能得到充分的光強,，儀器必須保持一定的狹縫寬度,。由狹縫射出后投射到被測物質(zhì)上的光，是一個有限寬度的譜帶——光譜通帶,。隨光譜通帶寬度的增大,，吸收光譜的分辨率降低，并偏離朗伯一比爾定律。
(2)非吸收光的影響：當來自出射狹縫的光的光譜通帶寬度大于吸收光譜譜帶時,，投射在被測物質(zhì)上的光就含有非吸收光,。這不僅能使靈敏度降低，且能使校準曲線向橫坐標軸彎曲而偏離朗伯一比爾定律,。
(3)非平行光的影向：當入射光與比色皿的光學面不垂直時,，通過被測物質(zhì)的實際光程就大于比色皿的厚度。這種情況所造成的影響很小,，一般可忽略不計,。
(4)散射的影響：當被測物質(zhì)不均勻，其巾含有微小顆粒物,，如懸浮物或膠態(tài)粒子等散射質(zhì)點時,，入射光通過該物質(zhì)就會使部分光被散射而損失，從而減小了透射光的性度,，增大了實際吸光度,，導斂偏離朗伯一比爾定律。
(5)熒光的影響：某些物質(zhì)吸收光后能再新輻射出波長和入射光波長相近的熒光而導致朗們一比爾定律失效,?；瘜W反應(yīng)的影響 在被測溶液中待測組分發(fā)發(fā)生解離、締合,、光化等作用,，或與溶劑相互作都將使待測組分的吸收曲線發(fā)生明顯的改變，如吸收峰的形狀,、位置,、強度以及精密結(jié)構(gòu)都會發(fā)生變化，從而導致偏離朗伯一比爾定律,。
(6)溶劑的影響：溶劑對吸收光潛的影響頗為最要,。輔射能引起某化合物的分解而導致偏離朗們比爾定律。
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