如何操作elisa試劑盒

來源：優(yōu)利科（上海）生命科學有限公司 2022年11月17日 13:39

標本要求：

1.標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2.不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

elisa試劑盒操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

32ng/mL	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
16ng/mL	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
8ng/mL	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
4ng/mL	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
2ng/mL	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7.溫育：操作同3,。

8.洗滌：操作同5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘。

10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

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