藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制,。

     藥品微生物的檢驗(yàn)結(jié)果受很多因素的影響，如樣品中微生物可能分布不均勻、微生物檢驗(yàn)方法的誤差較大等,。因此,，在藥品微生物檢驗(yàn)中,，為保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性,，必須使用經(jīng)驗(yàn)證的檢測(cè)方法并嚴(yán)格按照藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范要求進(jìn)行試驗(yàn)。

     藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范包括以下幾個(gè)方面：人員,、培養(yǎng)基,、菌種、實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行,、設(shè)備,、文件、實(shí)驗(yàn)記錄,、結(jié)果的判斷等,。

人員

      從事藥品微生物試驗(yàn)工作的人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識(shí)的教育背景,。

      實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)依據(jù)所在崗位和職責(zé)接受相應(yīng)的培訓(xùn),，在確認(rèn)他們可以承擔(dān)某一試驗(yàn)前,，他們不能獨(dú)立從事該項(xiàng)微生物試驗(yàn)。應(yīng)保證所有人員在上崗前接受勝任工作所必需的設(shè)備操作,、微生物檢驗(yàn)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室生物安全等方面的培訓(xùn),，經(jīng)考核合格后方可上崗，同時(shí),，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定所有級(jí)別實(shí)驗(yàn)人員的繼續(xù)教育計(jì)劃,。

     檢驗(yàn)人員必須熟悉相關(guān)檢測(cè)方法、程序,、檢測(cè)目的和結(jié)果評(píng)價(jià),。微生物實(shí)驗(yàn)室的管理者其專業(yè)技能和經(jīng)驗(yàn)水平應(yīng)與他們的職責(zé)范圍相符，如：管理技能,、實(shí)驗(yàn)室安全,、試驗(yàn)安排、預(yù)算,、實(shí)驗(yàn)研究,、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評(píng)估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查、技術(shù)報(bào)告書寫等,。

     實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過參加內(nèi)部質(zhì)量控制,、能力驗(yàn)證或使用標(biāo)準(zhǔn)菌株等方法客觀評(píng)估檢驗(yàn)人員的能力，必要時(shí)對(duì)其進(jìn)行再培訓(xùn)并重新評(píng)估,。當(dāng)使用一種非經(jīng)常使用的方法或技術(shù)時(shí),，有必要在檢測(cè)前確認(rèn)微生物檢測(cè)人員的操作技能。

      所有人員的培訓(xùn),、考核內(nèi)容和結(jié)果均應(yīng)記錄歸檔,。

培養(yǎng)基

      培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果,。適宜的培養(yǎng)基制備方法,、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。

     1 ．培養(yǎng)基的制備

      培養(yǎng)基可按處方配制,，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基,。

      在制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨(dú)配方組分進(jìn)行配制,。脫水培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明,，配制時(shí)應(yīng)按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求，不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基,。脫水培養(yǎng)基或單獨(dú)配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下貯藏,，如低溫,、干燥和避光，所有的容器應(yīng)密封,，尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器,。商品化的成品培養(yǎng)基除了應(yīng)附有處方和使用說明外，還應(yīng)注明有效期,、貯藏條件,、適用性檢查試驗(yàn)的質(zhì)控菌和用途。

      為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠,，各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應(yīng)準(zhǔn)確稱量,，并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基&最&常&用的溶劑是純化水,，特殊情況下,，可能需要用去離子水和蒸餾水。應(yīng)記錄各稱量物的重量和水的使用量,。

      配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應(yīng)潔凈,，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留，對(duì)熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌,，以保證培養(yǎng)基的無菌性,。

      脫水培養(yǎng)基應(yīng)完&全溶解于水中，再行分裝與滅菌,。配制時(shí)若需要加熱助溶,，應(yīng)注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深,。如需要添加其他組分時(shí),，加入后充分混勻。應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗(yàn)證的參數(shù)進(jìn)行培養(yǎng)基的滅菌,。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料,。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌,。

      培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件,，有可能引起顏色變化、透明度降低,、瓊脂凝固力或pH 的改變,。因此，培養(yǎng)基應(yīng)采用驗(yàn)證的滅菌程序滅菌,，培養(yǎng)基滅菌方法和條件,，應(yīng)通過無菌性試驗(yàn)和促生長(zhǎng)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。此外,，對(duì)高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗(yàn)證,，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布,。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會(huì)破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長(zhǎng)的質(zhì)量,。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度,。因此，應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性,，進(jìn)行全面的滅菌程序驗(yàn)證,。

      應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH值（冷卻至室溫25 ℃ 測(cè)定）,。若培養(yǎng)基處方中未列出pH 值的范圍,，除非經(jīng)驗(yàn)證表明培養(yǎng)基的pH 值允許的變化范圍很寬，否則,，pH值的范圍不能超過規(guī)定值士0.2 ,。

      制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行下列檢查：容器和蓋子不得破裂，裝量應(yīng)相同,，盡量避免形成氣泡,，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶,，不得污染微生物等,。應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查,。

      2 ．培養(yǎng)基的貯藏

自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱,、批號(hào)、配制日期等信息,，并在已驗(yàn)證的條件下貯藏,。商品化的成品培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有名稱、批號(hào),、生產(chǎn)日期,、失效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性，生產(chǎn)商和使用者應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進(jìn)行貯藏,，所采用的貯藏和運(yùn)輸條件應(yīng)使成品培養(yǎng)基最&低限度的失去水分并提供機(jī)械保護(hù),。

      培養(yǎng)基滅菌后若貯藏在高壓滅菌器中，質(zhì)量可能會(huì)受影響,，一般不提倡這種存放法,。瓊脂培養(yǎng)基不得在O ℃ 或O ℃ 以下存放，因?yàn)槔鋬隹赡芷茐哪z特性,。培養(yǎng)基應(yīng)避光保存,，若要長(zhǎng)期保存，應(yīng)置于密閉容器中以防止水分流失,。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用,，如置冰箱保存,，一般不超過1周，且應(yīng)密閉包裝,，若延長(zhǎng)保存期限,，保存期需經(jīng)驗(yàn)證確定。

      固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許1 次,，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染,。培養(yǎng)基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽加熱。若使用微波爐,，應(yīng)避免培養(yǎng)基過度受熱及水分的蒸發(fā),，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應(yīng)置于45 ～50 ℃ 的水浴中,，不得超過8 小時(shí),。傾注培養(yǎng)基時(shí)， 應(yīng)擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分,，避免容器外壁的水滴進(jìn)人培養(yǎng)基中造成污染,。

      使用過的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應(yīng)按照國家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。

      3 ．質(zhì)量控制試驗(yàn)

      實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)試驗(yàn)用培養(yǎng)基建立質(zhì)量控制程序,，以確保所用培養(yǎng)基質(zhì)量符合相關(guān)檢測(cè)的需要,。

      實(shí)驗(yàn)室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于其制備過程，采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長(zhǎng)或復(fù)蘇,，從而影響試驗(yàn)結(jié)果的可靠性,。

      所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項(xiàng)目是pH ,、適用性檢查試驗(yàn),，定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應(yīng)依據(jù)適用性檢查試驗(yàn)確定培養(yǎng)基質(zhì)量是否符合要求,。有效期的長(zhǎng)短將取決于在一定存放條件下（包括容器特性及密封性）的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性,。

      除藥典附錄另有規(guī)定外，在實(shí)驗(yàn)室中,，若采用已驗(yàn)證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控,，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)行1 次。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗(yàn)證,，那么每一批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn),，試驗(yàn)的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān)附錄中進(jìn)行選擇，也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株,。

      培養(yǎng)基的質(zhì)屋控制試驗(yàn)若不符合規(guī)定,，應(yīng)尋找不合格的原因，以防止問題重復(fù)出現(xiàn)。任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用,。

      用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù),，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基,，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100 ％的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果,。

菌種

      試驗(yàn)過程中，生物樣本可能是最敏感的,，因?yàn)樗鼈兊幕钚院吞匦砸蕾囉诤线m的試驗(yàn)操作和貯藏條件,。實(shí)驗(yàn)室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使盡可能減少菌種污染和生長(zhǎng)特性的改變,。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗(yàn)結(jié)果一致性的重要保證,。

      藥品微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)來自認(rèn)可的國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生菌株,。

      標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按已驗(yàn)證的方法進(jìn)行,。從國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)后,，即為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株,。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株保存時(shí),，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中,，并分裝于小瓶中，建議采用低溫冷凍干燥,、液氮貯存,、超低溫冷凍（低于-30 ℃ ）等方法保存。低于-70 ℃ 或低溫冷凍干燥方法可以延長(zhǎng)菌種保存時(shí)間,。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株可用于制備每月或每周1 次轉(zhuǎn)種的工作菌株,。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用,。

       工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制,，不得超過5 代（從菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代），以防止過度的傳代增加菌種變異的風(fēng)險(xiǎn),。1 代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長(zhǎng)的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng),，任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代1 次。必要時(shí),，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn),。

       工作菌株不可替代標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株,。

       實(shí)驗(yàn)室必須建立和保存其所有菌種的進(jìn)出,、收集、貯藏、確認(rèn)試驗(yàn)以及銷毀的記錄,，應(yīng)有菌種管理的程序文件（從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株）,，該程序包括：標(biāo)準(zhǔn)菌種的申購記錄；從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株操作及記錄,，菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代,，并做純度、特性等實(shí)驗(yàn)室所需關(guān)鍵指標(biāo)的確認(rèn),，并記錄,；每支菌種都應(yīng)注明其名稱、標(biāo)準(zhǔn)號(hào),、接種日期,、傳代數(shù)；菌種生長(zhǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件,；菌種保藏的位置和條件,；其他需要的程序。

實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行

      實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有進(jìn)行微生物檢測(cè)所需的適宜,、充分的設(shè)施條件,。實(shí)驗(yàn)室的布局與設(shè)計(jì)應(yīng)充分考慮到良好微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范和實(shí)驗(yàn)室安全的要求。實(shí)驗(yàn)室布局設(shè)計(jì)的基本原則是既要最大可能防止微生物的污染,，又要防止檢驗(yàn)過程對(duì)環(huán)境和人員造成危害,。活動(dòng)區(qū)域的合理規(guī)劃及區(qū)分將提高微生物實(shí)驗(yàn)室操作的可靠性,。

      通常,，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)劃分成相應(yīng)的潔凈區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時(shí)應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，在時(shí)間或空間上有效分隔不相容的試驗(yàn)活動(dòng),，將交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)降低到最&低